Erythrocyte oxidative stress markers in children with sickle cell disease

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Fosfatos de sódio e de potássio, saponina, ácido tricloroacético e ácido tiobarbitúrico foram fornecidos pela Vetec Ltda. (Rio de Janeiro, RJ, Brasil). Citrato de sódio, tris (hidroximetil) aminometano e metanol foram obtidos da Merck (Darmstadt, Alemanha). A atividade da G6‐PD foi determinada com o PD410 dos Laboratórios Randox (Antrim, Reino Unido). Todos os solventes orgânicos eram de alta qualidade e passaram por dupla destilação e todas as outras substâncias químicas eram de grau analítico.Amostras de sangueForam obtidas amostras de sangue de 45 crianças diagnosticadas com doença falciforme (21 meninos e 24 meninas com média de 9 anos; faixa: 3‐13) no Departamento de Hematopediatria do Hospital das Clínicas da Universidade Federal do Paraná (UFPR). Um grupo de controle consistia em 280 crianças sem hemoglobinopatias (137 meninos e 143 meninas com média de 10 anos; faixa: 8‐11), participantes do projeto de extensão universitário intitulado “Incidência de anemias e parasitoses em crianças com idade escolar nas escolas municipais da região metropolitana de Curitiba – Paraná – Brasil”, da UFPR. O uso de seres humanos foi aprovado pelo Comitê de Ética em Pesquisa Envolvendo Seres Humanos do Hospital de Clínicas da UFPR. Foi obtido o consentimento informado dos pais ou responsáveis de todas as crianças. As crianças com qualquer alteração hematológica foram excluídas.Foi coletada uma amostra de sangue venoso de 5mL de cada paciente em tubos revestidos de K3‐EDTA. Foram separadas alíquotas (200μL) de sangue total para determinação da atividade da G6‐PD. Então, as amostras foram centrifugadas a 3.000g por 10 minutos. O plasma e a camada leucoplaquetária (buffy coat) foram removidos por aspiração e os eritrócitos foram lavados com tampão fosfato‐salino (PBS) (NaCl, 150mmol/L; NaH2PO4, 1,9mmol/L; e Na2HPO4, 8,1mmol/L) três vezes. Por fim, os glóbulos vermelhos foram suspensos em solução PBS e água para obter suspensões com hematócritos de 10% e 40% para a solução PBS e 40% para a solução de água. A concentração de hemoglobina foi medida em todas as suspensões. Nem todas as análises foram medidas em cada amostra devido aos volumes limitados disponíveis.Parâmetros hematológicosO hemograma completo foi determinado com o contador eletrônico de células Pentra 80 (Horiba Medical, Japão).Concentração de meta‐hemoglobinaA concentração de meta‐hemoglobina foi determinada de acordo com um método com base em Naoum et al.<a class="elsevierStyleCrossRef" href="#bib0205">11</a> adaptado a pequenos volumes. As alíquotas (100μL) de suspensões de eritrócitos a 10% foram hemolizadas com 100μL de saponina a 1% e estabilizadas em 1.000μL de 60mmol/L de tampão de fosfato; então, a absorbância foi determinada a 630nm (para metemoglobina) e 540nm (para oxi‐hemoglobina). A concentração de metemoglobina foi expressa em termos percentuais em relação à concentração de hemoglobina.Determinação da glutationa reduzidaA concentração de glutationa reduzida (GSH) foi determinada por um método anteriormente descrito por Beutler,<a class="elsevierStyleCrossRef" href="#bib0210">12</a> ao avaliar a redução do ácido 5,5′‐ditiobis(2‐nitrobenzoico) (DTNB) por compostos de sulfidrila a partir da formação de um produto aniônico de coloração amarela cuja absorbância foi medida em 412nm. Foram usadas alíquotas de 50μL de suspensão de células vermelhas a 40% no PBS. 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A mistura da reação foi incubada por 3 horas a 37°C, com agitação. A extensão da hemólise foi determinada por espectrofotometria por meio da medição da absorbância do hemolisado a 540nm em um leitor de microplacas (Thermo Scientific, Thermo Plate, EUA). Glóbulos vermelhos em uma solução de 200mmol/L de AAPH foram o controle de 100% de hemólise.Atividade da glucose‐6‐fosfato desidrogenase (G6‐PD)Alíquotas (200μL) de sangue total antes do isolamento de eritrócitos foram lavadas com PBS de 2mL três vezes. A atividade da G6‐PD foi determinada com o analisador automático Cobas Mira (Roche, Mannheim, Alemanha) com o kit comercial PD410 (Randox, Antrim, Reino Unido) conforme descrito no manual do fabricante.Atividade da superóxido dismutaseA atividade enzimática teve como base um método adaptado a partir da auto‐oxidação de pirogalol de Beutler.<a class="elsevierStyleCrossRef" href="#bib0210">12</a> Alíquotas de 200μL de glóbulos vermelhos embaladas foram hemolisadas com 300μL de água deionizada fria e foi preparado um extrato de clorofórmio e etanol. A mistura foi centrifugada a 2300g por 10min. Quantidades variáveis do extrato sobrenadante límpido (0, 20, 40, 60, 80, 100 e 300μL) foram adicionadas a uma solução de tris‐hidrocloreto (tris‐HCl) e água. Após 10min, 20μL de uma solução de pirogalol a 1mmol/L foram adicionados a cada tubo e a absorbância foi aferida a 412nm em uma microplaca. A quantidade de extrato necessária para inibir a auto‐oxidação do pirogalol em 50% é usada para determinar o nível de atividade enzimática.Atividade da catalaseA atividade enzimática foi determinada por meio de um método adaptado de Beutler,<a class="elsevierStyleCrossRef" href="#bib0210">12</a> a partir da medida da taxa de decomposição do peróxido de hidrogênio pela catalase por espectrofotometria a 240nm. Alíquotas de 50μL de uma suspensão de glóbulos vermelhos a 40% foram adicionadas a 450μL de uma solução hemolisante de β‐mercaptoetanol (0,7mmol/L) e EDTA (0,27mol/L). Essa solução foi diluída em PBS na proporção 1:100 e 10μLda solução final foram adicionados a 990μLda solução de peróxido de hidrogênio. A diminuição da absorbância do sistema foi aferida por 10min.Espécies reativas de oxigênio intracelularEspécies reativas de oxigênio foram determinadas de acordo com um método com base em López‐Revuelta et al.,<a class="elsevierStyleCrossRef" href="#bib0225">15</a> adaptado a pequenos volumes de amostras de sangue em microplacas. Eritrócitos (995μL de uma suspensão de PBS a 10% v/v) foram incubados com 5μL de diclorodihidrofluoresceína diacetato (DCFDA, 10mol/L) a 37°C por 30 minutos. Essa suspensão foi diluída em 9,0mL de PBS e 37,5μL dessa solução foram, então, adicionados a 112,5μL de PBS em placas de 96 poços. As espécies reativas de oxigênio foram determinadas por meio de um fluorímetro GloMax®‐Multi Microplate Multimode Reader (Promega Corporation, EUA). Nessas condições, o DCFDA foi hidrolisado a 2′,7′‐diclorodihidrofluoresceína (DCFH2), que, então, foi disponibilizado para oxidação pelas espécies reativas de oxigênio (ERO) para produzir 2,7‐diclorofluoresceína (DCF). A fluorescência foi determinada a 530nm após excitação a 495nm. A formação de espécies reativas de oxigênio foi expressa como unidades de fluorescência (UF)/gHb.Análise estatísticaFoi feita com o software Statistica 8.0 (StatSoft, EUA). Não foi identificado valor atípico. O teste de Kolmogorov‐Smirnov foi usado para avaliar a normalidade e todos os parâmetros foram distribuídos normalmente. Os dados foram expressos como média±desvio padrão e comparados entre grupos que usam o teste t de Student; um valor de p<0,05 foi considerado significativo.ResultadosOs dados provenientes de hemogramas de crianças saudáveis e pacientes com doença falciforme estão ilustrados na <a class="elsevierStyleCrossRef" href="#tbl0005">tabela 1</a>. Foram observadas as diferenças estatisticamente significativas para todos os parâmetros, exceto para a hemoglobina corpuscular média (HCM) (p<0,05).<elsevierMultimedia ident="tbl0005"></elsevierMultimedia>Os dados provenientes de parâmetros de estresse oxidativo estão ilustrados na <a class="elsevierStyleCrossRef" href="#tbl0010">tabela 2</a>, que compara os pacientes com doença falciforme e crianças saudáveis. Foram observadas as diferenças estatisticamente significativas para meta‐hemoglobina, TBARS, percentual de hemólise, atividade da G6‐PD e espécies reativas de oxigênio (p<0,05).<elsevierMultimedia ident="tbl0010"></elsevierMultimedia>DiscussãoOs eritrócitos normais sofrem estresse oxidativo devido à produção de espécies reativas de oxigênio que resultam do metabolismo de oxigênio. Contudo, isso é restaurado de forma eficiente pelos sistemas antioxidantes altamente poderosos da célula, sem qualquer efeito problemático. O estresse oxidativo ocorre como resultado de um desequilíbrio entre a produção de espécies reativas de oxigênio e as defesas antioxidantes.<a class="elsevierStyleCrossRef" href="#bib0230">16</a>Na doença falciforme, o estresse oxidativo poderá ser resultado de níveis elevados de meta‐hemoglobina S, que é menos estável do que a meta‐hemoglobina A e leva à hemólise intravascular,<a class="elsevierStyleCrossRef" href="#bib0235">17</a> à lesão de isquemia‐reperfusão, à inflamação crônica e a uma maior auto‐oxidação da hemoglobina falciforme.<a class="elsevierStyleCrossRefs" href="#bib0240">18,19</a> Muitos antioxidantes potenciais são de interesse com relação à doença falciforme<a class="elsevierStyleCrossRef" href="#bib0250">20</a> e vários estudos demonstraram aumentos significativos em marcadores de estresse e comportamentos diferentes em sistemas de defesa antioxidante em pacientes com doença falciforme quando comparados com indivíduos saudáveis.<a class="elsevierStyleCrossRef" href="#bib0255">21</a>Nossos resultados para as amostras de sangue confirmam várias características da doença falciforme já conhecidas, como a anemia hemolítica,<a class="elsevierStyleCrossRef" href="#bib0255">21</a> comprovada por baixos níveis de hemoglobina,<a class="elsevierStyleCrossRef" href="#bib0185">7</a> e o aumento nos níveis dos glóbulos brancos e das plaquetas.<a class="elsevierStyleCrossRef" href="#bib0180">6</a>Conforme demonstrado anteriormente,<a class="elsevierStyleCrossRef" href="#bib0190">8</a> os níveis de meta‐hemoglobina aumentam em indivíduos com a doença falciforme. Existe uma transferência de elétrons na interação de ligação entre o heme e o oxigênio (O2) na hemoglobina oxigenada. Quando a hemoglobina está desoxigenada, o ferro heme normalmente continua no estado ferroso.<a class="elsevierStyleCrossRef" href="#bib0250">20</a> Nessa troca, quando ocorre a auto‐oxidação da hemoglobina, as alterações resultam em meta‐hemoglobina, com o ferro heme no estado férrico.<a class="elsevierStyleCrossRef" href="#bib0190">8</a> As alterações na função ou na estrutura dos eritrócitos podem levar a um fluxo maior de meta‐hemoglobina, que pode levar ao estresse oxidativo.<a class="elsevierStyleCrossRef" href="#bib0225">15</a>O aumento do estresse oxidativo intra e extraeritrocitário induz a peroxidação lipídica e a instabilidade da membrana.<a class="elsevierStyleCrossRef" href="#bib0220">14</a> As TBARS são um dos biomarcadores existentes e essa avaliação é uma quantificação indireta dos processos de peroxidação lipídica, o que faz disso um bom indicador de estímulos pró‐oxidantes. De acordo com os resultados registrados anteriormente,<a class="elsevierStyleCrossRefs" href="#bib0245">19,20,22</a> observamos níveis significativamente mais elevados de TBARS em pacientes com a doença falciforme do que nos controles.Os eritrócitos falciformes rígidos e deformados têm uma vida útil reduzida e são submetidos a hemólise tanto intravascular quanto extravascular.<a class="elsevierStyleCrossRef" href="#bib0265">23</a> Observamos percentuais mais elevados de hemólise em eritrócitos de crianças com a doença falciforme do que no grupo de controle, tanto em suspensões de base de eritrócitos quanto em suspensões incubadas com um agente oxidante.A G6‐PD é uma enzima importante relacionada à defesa antioxidante em eritrócitos.<a class="elsevierStyleCrossRef" href="#bib0250">20</a> Observamos uma atividade mais elevada dessa enzima em pacientes com a doença falciforme do que no grupo de controle. Foi registrado anteriormente que os eritrócitos de pacientes com a doença falciforme apresentam um percentual cada vez maior de reticulócitos, ao passo que a atividade da G6‐PD nos reticulócitos é normal, mas cai exponencialmente conforme as células vermelhas envelhecem.<a class="elsevierStyleCrossRef" href="#bib0270">24</a>As células falciformes geram espontaneamente cerca de duas vezes mais espécies reativas de oxigênio do que os glóbulos vermelhos normais.<a class="elsevierStyleCrossRef" href="#bib0275">25</a> Em conformidade com os achados de George et al.,<a class="elsevierStyleCrossRef" href="#bib0280">26</a> também demonstramos níveis elevados de espécies reativas de oxigênio em eritrócitos falciformes.A glutationa reduzida (GSH) está presente em altas concentrações em eritrócitos e atua sozinha ou por meio da glutationa peroxidase como principal fonte redutora para manter a integridade da célula.<a class="elsevierStyleCrossRef" href="#bib0235">17</a> As medições de GSH e de sua forma oxidada glutationa dissulfeto (GSSG) foram consideradas indicadores úteis de estresse oxidativo in vivo.<a class="elsevierStyleCrossRef" href="#bib0285">27</a> A maior parte dos estudos em adultos com doença falciforme relatou alguns déficits na síntese endógena de GSH, provavelmente devido a seu consumo por meio do aumento na produção de oxidantes.<a class="elsevierStyleCrossRefs" href="#bib0280">26,28</a> Embora Rusanova et al.<a class="elsevierStyleCrossRef" href="#bib0260">22</a> tenham apresentado altos níveis de GSH em pacientes pediátricos com doença falciforme, no presente estudo não encontramos diferença nos níveis de GSH entre crianças com doença falciforme e o grupo de controle.A superóxido dismutase pode converter o superóxido em peróxido de hidrogênio e a catalase pode remover o peróxido de hidrogênio excedente.<a class="elsevierStyleCrossRef" href="#bib0230">16</a> Segundo Silva et al.,<a class="elsevierStyleCrossRef" href="#bib0250">20</a> o aumento na geração de pró‐oxidantes em doença falciforme resulta em uma deficiência de antioxidantes. Contudo, existem algumas discrepâncias entre estudos sobre superóxido dismutase e níveis de catalase nessa doença, alguns estudos observam o aumento da atividade e outros observam a diminuição dos níveis.<a class="elsevierStyleCrossRef" href="#bib0295">29</a> Um aumento na atividade dessas enzimas possivelmente constitui um mecanismo de defesa em resposta ao aumento do estresse oxidativo<a class="elsevierStyleCrossRef" href="#bib0245">19</a> ou pode ser consequência de um aumento no conteúdo de reticulócitos em amostras de sangue de pacientes com doença falciforme. Contudo, uma diminuição nos níveis das enzimas estava relacionada à gravidade da doença nos pacientes.<a class="elsevierStyleCrossRefs" href="#bib0250">20,22</a> Esses achados aparentemente contraditórios podem dever‐se às diferenças na extensão do estresse oxidativo, da gravidade da doença, do polimorfismo enzimático e do cofator enzimático.<a class="elsevierStyleCrossRef" href="#bib0295">29</a> Nossos resultados não mostraram diferença entre as atividades dessas enzimas em crianças com doença falciforme e em crianças saudáveis, de acordo com Cho et al.,<a class="elsevierStyleCrossRef" href="#bib0300">30</a> com relação à catalase. Esses resultados podem dever‐se à grande variabilidade individual encontrada nos pacientes.Em vista de evidências que sugerem que um excesso de estresse oxidativo tem implicações na fisiopatologia da doença falciforme, a avaliação de parâmetros de estresse oxidativo nesses pacientes poderá fornecer informações úteis sobre o uso de medicações atuais e poderá levar ao desenvolvimento de novas estratégias terapêuticas.<a class="elsevierStyleCrossRefs" href="#bib0200">10,19,20</a> O monitoramento do estresse oxidativo envolve a observação de diferentes parâmetros associados a biomarcadores pró‐oxidantes e antioxidantes.<a class="elsevierStyleCrossRef" href="#bib0285">27</a> Contudo, o uso de um biomarcador isolado e a medição de antioxidantes individuais provavelmente não são índices úteis de estado oxidativo. O equilíbrio oxidante‐antioxidante envolve reações bioquímicas que exigem a avaliação de muitos resultados.<a class="elsevierStyleCrossRef" href="#bib0280">26</a>Este estudo avaliou oito marcadores de estresse oxidativo, incluindo parâmetros pró‐oxidantes e antioxidantes. Os resultados indicam a presença de um estado hiperoxidativo em crianças com doença falciforme, que pode ser observado por seus níveis elevados de metemoglobina, TBARS, hemólise, espécies reativas de oxigênio e atividade da G6‐PD. Foram usadas técnicas simples para determinar esses parâmetros com pequenos volumes de sangue. Os parâmetros que apareceram alterados em crianças com doença falciforme podem ser úteis em avaliações de progressão da doença e tratamentos.Conflitos de interesseOs autores declaram não haver conflitos de interesse." "textoCompletoSecciones" => array:1 [ "secciones" => array:10 [ 0 => array:3 [ "identificador" => "xres696350" "titulo" => "Abstract" "secciones" => array:4 [ 0 => array:2 [ "identificador" => "abst0005" "titulo" => "Objective" ] 1 => array:2 [ "identificador" => "abst0010" "titulo" => "Methods" ] 2 => array:2 [ "identificador" => "abst0015" "titulo" => "Results" ] 3 => array:2 [ "identificador" => "abst0020" "titulo" => "Conclusions" ] ] ] 1 => array:2 [ "identificador" => "xpalclavsec706084" "titulo" => "Keywords" ] 2 => array:3 [ "identificador" => "xres696349" "titulo" => "Resumo" "secciones" => array:4 [ 0 => array:2 [ "identificador" => "abst0025" "titulo" => "Objetivo" ] 1 => array:2 [ "identificador" => "abst0030" "titulo" => "Métodos" ] 2 => array:2 [ "identificador" => "abst0035" "titulo" => "Resultados" ] 3 => array:2 [ "identificador" => "abst0040" "titulo" => "Conclusões" ] ] ] 3 => array:2 [ "identificador" => "xpalclavsec706085" "titulo" => "Palavras‐chave" ] 4 => array:2 [ "identificador" => "sec0005" "titulo" => "Introdução" ] 5 => array:3 [ "identificador" => "sec0010" "titulo" => "Métodos" "secciones" => array:12 [ 0 => array:2 [ "identificador" => "sec0015" "titulo" => "Substâncias químicas" ] 1 => array:2 [ "identificador" => "sec0020" "titulo" => "Amostras de sangue" ] 2 => array:2 [ "identificador" => "sec0025" "titulo" => "Parâmetros hematológicos" ] 3 => array:2 [ "identificador" => "sec0030" "titulo" => "Concentração de meta‐hemoglobina" ] 4 => array:2 [ "identificador" => "sec0035" "titulo" => "Determinação da glutationa reduzida" ] 5 => array:2 [ "identificador" => "sec0040" "titulo" => "Peroxidação lipídica" ] 6 => array:2 [ "identificador" => "sec0045" "titulo" => "Medição da hemólise" ] 7 => array:2 [ "identificador" => "sec0050" "titulo" => "Atividade da glucose‐6‐fosfato desidrogenase (G6‐PD)" ] 8 => array:2 [ "identificador" => "sec0055" "titulo" => "Atividade da superóxido dismutase" ] 9 => array:2 [ "identificador" => "sec0060" "titulo" => "Atividade da catalase" ] 10 => array:2 [ "identificador" => "sec0065" "titulo" => "Espécies reativas de oxigênio intracelular" ] 11 => array:2 [ "identificador" => "sec0070" "titulo" => "Análise estatística" ] ] ] 6 => array:2 [ "identificador" => "sec0075" "titulo" => "Resultados" ] 7 => array:2 [ "identificador" => "sec0080" "titulo" => "Discussão" ] 8 => array:2 [ "identificador" => "sec0085" "titulo" => "Conflitos de interesse" ] 9 => array:1 [ "titulo" => "Referências" ] ] ] "pdfFichero" => "main.pdf" "tienePdf" => true "fechaRecibido" => "2015-07-06" "fechaAceptado" => "2015-10-16" "PalabrasClave" => array:2 [ "en" => array:1 [ 0 => array:4 [ "clase" => "keyword" "titulo" => "Keywords" "identificador" => "xpalclavsec706084" "palabras" => array:3 [ 0 => "Oxidative stress" 1 => "Sickle cell disease" 2 => "Children" ] ] ] "pt" => array:1 [ 0 => array:4 [ "clase" => "keyword" "titulo" => "Palavras‐chave" "identificador" => "xpalclavsec706085" "palabras" => array:3 [ 0 => "Estresse oxidativo" 1 => "Doença falciforme" 2 => "Crianças" ] ] ] ] "tieneResumen" => true "resumen" => array:2 [ "en" => array:3 [ "titulo" => "Abstract" "resumen" => "ObjectiveTo determine eight parameters of oxidative stress markers in erythrocytes from children with sickle cell disease and compare with the same parameters in erythrocytes from healthy children, since oxidative stress plays an important role in the pathophysiology of sickle cell disease and because this disease is a serious public health problem in many countries. MethodsBlood samples were obtained from 45 children with sickle cell disease (21 males and 24 females with a mean age of 9 years; range: 3–13 years) and 280 blood samples were obtained from children without hemoglobinopathies (137 males and 143 females with a mean age of 10 years; range: 8–11 years), as a control group. All blood samples were analyzed for methemoglobin, reduced glutathione, thiobarbituric acid reactive substances, percentage of hemolysis, reactive oxygen species, and activity of the enzymes glucose 6‐phosphate dehydrogenase, superoxide dismutase, and catalase. Data were analyzed using Student's t‐test and were expressed as the mean±standard deviation. A p‐value of <0.05 was considered significant. ResultsSignificant differences were observed between children with sickle cell disease and the control group for the parameters methemoglobin, thiobarbituric acid reactive substances, hemolysis, glucose 6‐phosphate dehydrogenase activity, and reactive oxygen species, with higher levels in the patients than in the controls. ConclusionsOxidative stress parameters in children's erythrocytes were determined using simple laboratory methods with small volumes of blood; these biomarkers can be useful to evaluate disease progression and outcomes in patients." 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Em todas as amostras foram determinados meta‐hemoglobina, glutationa reduzida, substâncias reativas ao ácido tiobarbitúrico, porcentagem de hemólise, espécies reativas de oxigênio e atividade das enzimas glucose6‐fosfato desidrogenase, superóxido dismutase e catalase. Os dados foram analisados com o teste t de Student e foram expressos como média±desvio padrão. Um valor de p<0,05 foi considerado significativo. ResultadosForam observadas diferenças significativas entre as crianças com doença falciforme e o grupo controle para os parâmetros meta‐hemoglobina, substâncias reativas ao ácido tiobarbitúrico, porcentagem de hemólise, espécies reativas de oxigênio e atividade da enzima glucose6‐fosfato desidrogenase, com níveis aumentados nos pacientes. ConclusõesFoi possível determinar parâmetros de estresse oxidativo em eritrócitos de crianças, com técnicas laboratoriais simples e pequenos volumes de sangue. Esses biomarcadores podem ser úteis na avaliação da progressão e dos resultados de tratamentos da doença." "secciones" => array:4 [ 0 => array:2 [ "identificador" => "abst0025" "titulo" => "Objetivo" ] 1 => array:2 [ "identificador" => "abst0030" "titulo" => "Métodos" ] 2 => array:2 [ "identificador" => "abst0035" "titulo" => "Resultados" ] 3 => array:2 [ "identificador" => "abst0040" "titulo" => "Conclusões" ] ] ] ] "NotaPie" => array:1 [ 0 => array:2 [ "etiqueta" => "☆" "nota" => "Como citar este artigo: Hermann PB, Pianovski MA, Henneberg R, Nascimento AJ, Leonart MS. Erythrocyte oxidative stress markers in children with sickle cell disease. 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entry_with_role_rowhead " align="left" valign="top">Hematócrito (%)<a class="elsevierStyleCrossRef" href="#tblfn0005">a</a> \t\t\t\t\t\t\n \t\t\t\t</td><td class="td" title="table-entry " align="char" valign="top">39,4±2,7 \t\t\t\t\t\t\n \t\t\t\t</td><td class="td" title="table-entry " align="char" valign="top">6,7 \t\t\t\t\t\t\n \t\t\t\t</td><td class="td" title="table-entry " align="char" valign="top">26,7±5,6 \t\t\t\t\t\t\n \t\t\t\t</td><td class="td" title="table-entry " align="char" valign="top">20,9 \t\t\t\t\t\t\n \t\t\t\t</td><td class="td" title="table-entry " align="char" valign="top">< 0,001 \t\t\t\t\t\t\n \t\t\t\t</td></tr><tr title="table-row"><td class="td-with-role" title="table-entry ; entry_with_role_rowhead " align="left" valign="top">VCM (fl)<a class="elsevierStyleCrossRef" href="#tblfn0005">a</a> \t\t\t\t\t\t\n \t\t\t\t</td><td class="td" title="table-entry " align="char" valign="top">82,3±3,9 \t\t\t\t\t\t\n \t\t\t\t</td><td class="td" title="table-entry " align="char" valign="top">4,8 \t\t\t\t\t\t\n \t\t\t\t</td><td class="td" title="table-entry " align="char" valign="top">86,3±11,8 \t\t\t\t\t\t\n \t\t\t\t</td><td class="td" title="table-entry " align="char" valign="top">13,7 \t\t\t\t\t\t\n \t\t\t\t</td><td class="td" title="table-entry " align="char" valign="top">< 0,05 \t\t\t\t\t\t\n \t\t\t\t</td></tr><tr title="table-row"><td class="td-with-role" title="table-entry ; entry_with_role_rowhead " align="left" valign="top">HCM (pg) \t\t\t\t\t\t\n \t\t\t\t</td><td class="td" title="table-entry " align="char" valign="top">28,2±1,6 \t\t\t\t\t\t\n \t\t\t\t</td><td class="td" title="table-entry " align="char" valign="top">5,5 \t\t\t\t\t\t\n \t\t\t\t</td><td class="td" title="table-entry " align="char" valign="top">28,9±4,64 \t\t\t\t\t\t\n \t\t\t\t</td><td class="td" title="table-entry " align="char" valign="top">16,1 \t\t\t\t\t\t\n \t\t\t\t</td><td class="td" title="table-entry " align="char" valign="top">> 0,05 \t\t\t\t\t\t\n \t\t\t\t</td></tr><tr title="table-row"><td class="td-with-role" title="table-entry ; entry_with_role_rowhead " align="left" valign="top">CHCM (g/dL)<a class="elsevierStyleCrossRef" href="#tblfn0005">a</a> \t\t\t\t\t\t\n \t\t\t\t</td><td class="td" title="table-entry " align="char" valign="top">34,3±1,2 \t\t\t\t\t\t\n \t\t\t\t</td><td class="td" title="table-entry " align="char" valign="top">3,6 \t\t\t\t\t\t\n \t\t\t\t</td><td class="td" title="table-entry " align="char" valign="top">33,5±2,1 \t\t\t\t\t\t\n \t\t\t\t</td><td class="td" title="table-entry " align="char" valign="top">6,2 \t\t\t\t\t\t\n \t\t\t\t</td><td class="td" title="table-entry " align="char" valign="top">< 0,01 \t\t\t\t\t\t\n \t\t\t\t</td></tr><tr title="table-row"><td class="td-with-role" title="table-entry ; entry_with_role_rowhead " align="left" valign="top">GB (103/mm3)<a class="elsevierStyleCrossRef" href="#tblfn0005">a</a> \t\t\t\t\t\t\n \t\t\t\t</td><td class="td" title="table-entry " align="char" valign="top">6,6±1,4 \t\t\t\t\t\t\n \t\t\t\t</td><td class="td" title="table-entry " align="char" valign="top">21,2 \t\t\t\t\t\t\n \t\t\t\t</td><td class="td" title="table-entry " align="char" valign="top">13,8±6,1 \t\t\t\t\t\t\n \t\t\t\t</td><td class="td" title="table-entry " align="char" valign="top">44,3 \t\t\t\t\t\t\n \t\t\t\t</td><td class="td" title="table-entry " align="char" valign="top">< 0,001 \t\t\t\t\t\t\n \t\t\t\t</td></tr><tr title="table-row"><td class="td-with-role" title="table-entry ; entry_with_role_rowhead " align="left" valign="top">PLA (103/mm3)<a class="elsevierStyleCrossRef" href="#tblfn0005">a</a> \t\t\t\t\t\t\n \t\t\t\t</td><td class="td" title="table-entry " align="char" valign="top">292,4±58,3 \t\t\t\t\t\t\n \t\t\t\t</td><td class="td" title="table-entry " align="char" valign="top">19,9 \t\t\t\t\t\t\n \t\t\t\t</td><td class="td" title="table-entry " align="char" valign="top">458,5±199,0 \t\t\t\t\t\t\n \t\t\t\t</td><td class="td" title="table-entry " align="char" valign="top">43,4 \t\t\t\t\t\t\n \t\t\t\t</td><td class="td" title="table-entry " align="char" valign="top">< 0,001 \t\t\t\t\t\t\n \t\t\t\t</td></tr></tbody></table> """ ] "imagenFichero" => array:1 [ 0 => "xTab1139701.png" ] ] ] "notaPie" => array:1 [ 0 => array:3 [ "identificador" => "tblfn0005" "etiqueta" => "a" "nota" => "Diferença estatisticamente significativa (teste t de Student)." ] ] ] "descripcion" => array:1 [ "pt" => "Valores hematológicos em crianças saudáveis (grupo de controle) e em pacientes com doença falciforme" ] ] 1 => array:8 [ "identificador" => "tbl0010" "etiqueta" => "Tabela 2" "tipo" => "MULTIMEDIATABLA" "mostrarFloat" => true "mostrarDisplay" => false "detalles" => array:1 [ 0 => array:3 [ "identificador" => "at2" "detalle" => "Tabela " "rol" => "short" ] ] "tabla" => array:3 [ "leyenda" => "METHb, meta‐hemoglobina; 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Os dados são apresentados como média±desvio padrão." "tablatextoimagen" => array:1 [ 0 => array:2 [ "tabla" => array:1 [ 0 => """ <table border="0" frame="\n \t\t\t\t\tvoid\n \t\t\t\t" class=""><thead title="thead"><tr title="table-row"><th class="td" title="table-head " align="" valign="top" scope="col"> \t\t\t\t\t\t\n \t\t\t\t</th><th class="td" title="table-head " align="left" valign="top" scope="col">Grupo de controle \t\t\t\t\t\t\n \t\t\t\t</th><th class="td" title="table-head " align="left" valign="top" scope="col">Pacientes \t\t\t\t\t\t\n \t\t\t\t</th><th class="td" title="table-head " align="left" valign="top" scope="col">p \t\t\t\t\t\t\n \t\t\t\t</th></tr><tr title="table-row"><th class="td" title="table-head " align="" valign="top" scope="col" style="border-bottom: 2px solid black"> \t\t\t\t\t\t\n \t\t\t\t</th><th class="td" title="table-head " align="left" valign="top" scope="col" style="border-bottom: 2px solid black">n=100 \t\t\t\t\t\t\n \t\t\t\t</th><th class="td" title="table-head " align="left" valign="top" scope="col" style="border-bottom: 2px solid black">n=45 \t\t\t\t\t\t\n \t\t\t\t</th><th class="td" title="table-head " align="" valign="top" scope="col" style="border-bottom: 2px solid black"> \t\t\t\t\t\t\n \t\t\t\t</th></tr></thead><tbody title="tbody"><tr title="table-row"><td class="td-with-role" title="table-entry ; entry_with_role_rowhead " align="left" valign="top">METHb (%)<a class="elsevierStyleCrossRef" href="#tblfn0010">a</a> \t\t\t\t\t\t\n \t\t\t\t</td><td class="td" title="table-entry " align="char" valign="top">2,2±0,4 \t\t\t\t\t\t\n \t\t\t\t</td><td class="td" title="table-entry " align="char" valign="top">4,5±1,1 \t\t\t\t\t\t\n \t\t\t\t</td><td class="td" title="table-entry " align="char" valign="top">< 0,001 \t\t\t\t\t\t\n \t\t\t\t</td></tr><tr title="table-row"><td class="td-with-role" title="table-entry ; entry_with_role_rowhead " align="left" valign="top">GSH (μmol/gHb) \t\t\t\t\t\t\n \t\t\t\t</td><td class="td" title="table-entry " align="char" valign="top">6,4±1,4 \t\t\t\t\t\t\n \t\t\t\t</td><td class="td" title="table-entry " align="char" valign="top">6,6±2,3 \t\t\t\t\t\t\n \t\t\t\t</td><td class="td" title="table-entry " align="char" valign="top">> 0,05 \t\t\t\t\t\t\n \t\t\t\t</td></tr><tr title="table-row"><td class="td-with-role" title="table-entry ; entry_with_role_rowhead " align="left" valign="top">TBARS (nmol/gHb)<a class="elsevierStyleCrossRef" href="#tblfn0010">a</a> \t\t\t\t\t\t\n \t\t\t\t</td><td class="td" title="table-entry " align="char" valign="top">24,6±5,8 \t\t\t\t\t\t\n \t\t\t\t</td><td class="td" title="table-entry " align="char" valign="top">41,5±20,1 \t\t\t\t\t\t\n \t\t\t\t</td><td class="td" title="table-entry " align="char" valign="top">< 0,001 \t\t\t\t\t\t\n \t\t\t\t</td></tr><tr title="table-row"><td class="td-with-role" title="table-entry ; entry_with_role_rowhead " align="left" valign="top">HEMO 0<a class="elsevierStyleCrossRefs" href="#tblfn0010">a,b</a> \t\t\t\t\t\t\n \t\t\t\t</td><td class="td" title="table-entry " align="char" valign="top">1,1±0,4 \t\t\t\t\t\t\n \t\t\t\t</td><td class="td" title="table-entry " align="char" valign="top">4,7±1,7 \t\t\t\t\t\t\n \t\t\t\t</td><td class="td" title="table-entry " align="char" valign="top">< 0,001 \t\t\t\t\t\t\n \t\t\t\t</td></tr><tr title="table-row"><td class="td-with-role" title="table-entry ; entry_with_role_rowhead " align="left" valign="top">HEMO 50<a class="elsevierStyleCrossRefs" href="#tblfn0010">a,b</a> \t\t\t\t\t\t\n \t\t\t\t</td><td class="td" title="table-entry " align="char" valign="top">25,0±7,9 \t\t\t\t\t\t\n \t\t\t\t</td><td class="td" title="table-entry " align="char" valign="top">49,2±19,4 \t\t\t\t\t\t\n \t\t\t\t</td><td class="td" title="table-entry " align="char" valign="top">< 0,001 \t\t\t\t\t\t\n \t\t\t\t</td></tr><tr title="table-row"><td class="td-with-role" title="table-entry ; entry_with_role_rowhead " align="left" valign="top">HEMO 100<a class="elsevierStyleCrossRefs" href="#tblfn0010">a,b</a> \t\t\t\t\t\t\n \t\t\t\t</td><td class="td" title="table-entry " align="char" valign="top">55,5±10,2 \t\t\t\t\t\t\n \t\t\t\t</td><td class="td" title="table-entry " align="char" valign="top">80,7±13,6 \t\t\t\t\t\t\n \t\t\t\t</td><td class="td" title="table-entry " align="char" valign="top">< 0,001 \t\t\t\t\t\t\n \t\t\t\t</td></tr><tr title="table-row"><td class="td-with-role" title="table-entry ; entry_with_role_rowhead " align="left" valign="top">HEMO 150<a class="elsevierStyleCrossRefs" href="#tblfn0010">a,b</a> \t\t\t\t\t\t\n \t\t\t\t</td><td class="td" title="table-entry " align="char" valign="top">80,1±7,5 \t\t\t\t\t\t\n \t\t\t\t</td><td class="td" title="table-entry " align="char" valign="top">92,6±5,1 \t\t\t\t\t\t\n \t\t\t\t</td><td class="td" title="table-entry " align="char" valign="top">< 0,001 \t\t\t\t\t\t\n \t\t\t\t</td></tr><tr title="table-row"><td class="td-with-role" title="table-entry ; entry_with_role_rowhead " align="left" valign="top">G6‐PD (U/gHb)<a class="elsevierStyleCrossRef" href="#tblfn0010">a</a> \t\t\t\t\t\t\n \t\t\t\t</td><td class="td" title="table-entry " align="char" valign="top">6,2±1,1 \t\t\t\t\t\t\n \t\t\t\t</td><td class="td" title="table-entry " align="char" valign="top">13,2±3,3 \t\t\t\t\t\t\n \t\t\t\t</td><td class="td" title="table-entry " align="char" valign="top">< 0,001 \t\t\t\t\t\t\n \t\t\t\t</td></tr><tr title="table-row"><td class="td-with-role" title="table-entry ; entry_with_role_rowhead " align="left" valign="top">SOD (U/gHb) \t\t\t\t\t\t\n \t\t\t\t</td><td class="td" title="table-entry " align="char" valign="top">1,846,1±457,2 \t\t\t\t\t\t\n \t\t\t\t</td><td class="td" title="table-entry " align="char" valign="top">1,832,4±647,1 \t\t\t\t\t\t\n \t\t\t\t</td><td class="td" title="table-entry " align="char" valign="top">> 0,05 \t\t\t\t\t\t\n \t\t\t\t</td></tr><tr title="table-row"><td class="td-with-role" title="table-entry ; entry_with_role_rowhead " align="left" valign="top">CAT (U/gHb) \t\t\t\t\t\t\n \t\t\t\t</td><td class="td" title="table-entry " align="char" valign="top">2,6 105±6,6 104 \t\t\t\t\t\t\n \t\t\t\t</td><td class="td" title="table-entry " align="char" valign="top">2,9 105±8,5 104 \t\t\t\t\t\t\n \t\t\t\t</td><td class="td" title="table-entry " align="char" valign="top">> 0,05 \t\t\t\t\t\t\n \t\t\t\t</td></tr><tr title="table-row"><td class="td-with-role" title="table-entry ; entry_with_role_rowhead " align="left" valign="top">ERO (UF/gHb)<a class="elsevierStyleCrossRef" href="#tblfn0010">a</a> \t\t\t\t\t\t\n \t\t\t\t</td><td class="td" title="table-entry " align="char" valign="top">1.468,0±296,2 \t\t\t\t\t\t\n \t\t\t\t</td><td class="td" title="table-entry " align="char" valign="top">2.427,5±1110,3 \t\t\t\t\t\t\n \t\t\t\t</td><td class="td" title="table-entry " align="char" valign="top">< 0,001 \t\t\t\t\t\t\n \t\t\t\t</td></tr></tbody></table> """ ] "imagenFichero" => array:1 [ 0 => "xTab1139702.png" ] ] ] "notaPie" => array:2 [ 0 => array:3 [ "identificador" => "tblfn0010" "etiqueta" => "a" "nota" => "Diferença estatisticamente significativa (teste t de Student)." ] 1 => array:3 [ "identificador" => "tblfn0015" "etiqueta" => "b" "nota" => "Percentuais de hemólise com acréscimo de 0‐150mmol/L de soluções de AAPH." ] ] ] "descripcion" => array:1 [ "pt" => "Parâmetros de estresse oxidativo em crianças normais (grupo de controle) e em pacientes com doença falciforme" ] ] ] "bibliografia" => array:2 [ "titulo" => "Referências" "seccion" => array:1 [ 0 => array:2 [ "identificador" => "bibs0005" "bibliografiaReferencia" => array:30 [ 0 => array:3 [ "identificador" => "bib0155" "etiqueta" => "1" "referencia" => array:1 [ 0 => array:2 [ "contribucion" => array:1 [ 0 => array:2 [ "titulo" => "Epidemiologic and social aspects of sickle cell disease" "autores" => array:1 [ 0 => array:2 [ "etal" => false "autores" => array:3 [ 0 => "A.A. 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Artigo original

Marcadores de estresse oxidativo em eritrócitos de crianças com doença falciforme

Priscila Bacarin Hermanna,

Autor para correspondência

prihermann@hotmail.com

Autor para correspondência.

, Mara Albonei Dudeque Pianovskib, Railson Henneberga, Aguinaldo José Nascimentoa, Maria Suely Soares Leonarta

a Departamento de Análise Clínica, Laboratório Clínico, Universidade Federal do Paraná (UFPR), Curitiba, PR, Brasil

b Departamento de Hematologia e Oncologia Pediátrica, Hospital de Clínicas, Universidade Federal do Paraná (UFPR), Curitiba, PR, Brasil

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que come&#231;a na inf&#226;ncia e &#233; respons&#225;vel principalmente por uma expectativa de vida reduzida nos pacientes afetados&#46;<a class="elsevierStyleCrossRef" href="#bib0165"><span class="elsevierStyleSup">3</span></a> As taxas de morbidez e mortalidade ainda s&#227;o altas em pacientes com a doen&#231;a falciforme&#46; No Brasil&#44; at&#233; 25&#37; das crian&#231;as afetadas faleceram durante seus primeiros 5 anos de vida&#44; por&#233;m o diagn&#243;stico precoce e o tratamento podem reduzir essas taxas e melhorar sua qualidade de vida&#46;<a class="elsevierStyleCrossRef" href="#bib0170"><span class="elsevierStyleSup">4</span></a></p><p id="par0015" class="elsevierStylePara elsevierViewall">A hemoglobina falciforme resulta de uma substitui&#231;&#227;o de &#225;cido glut&#226;mico por valina na sexta posi&#231;&#227;o da cadeia &#946; globina&#46;<a class="elsevierStyleCrossRef" href="#bib0175"><span class="elsevierStyleSup">5</span></a> A varia&#231;&#227;o ostensivamente m&#237;nima &#233; a origem da hemoglobina S e &#233; respons&#225;vel pelas altera&#231;&#245;es significativas na estabilidade e na solubilidade da mol&#233;cula&#46;<a class="elsevierStyleCrossRef" href="#bib0180"><span class="elsevierStyleSup">6</span></a> A tend&#234;ncia de a hemoglobina S desoxigenada se submeter a polimeriza&#231;&#227;o est&#225; na base de in&#250;meras express&#245;es das s&#237;ndromes falciformes com hem&#243;lise intravascular&#46;<a class="elsevierStyleCrossRef" href="#bib0185"><span class="elsevierStyleSup">7</span></a> A hemoglobina plasm&#225;tica livre pode iniciar a peroxida&#231;&#227;o lip&#237;dica e o heme&#44; que prontamente se dissocia da meta&#8208;hemoglobina&#44; pode contribuir significativamente para o estresse oxidativo&#44;<a class="elsevierStyleCrossRef" href="#bib0190"><span class="elsevierStyleSup">8</span></a> que pode desempenhar um papel significativo na fisiopatologia da disfun&#231;&#227;o microvascular relacionada &#224; doen&#231;a falciforme&#44; na vaso&#8208;oclus&#227;o e no desenvolvimento de les&#245;es nos &#243;rg&#227;os&#46;<a class="elsevierStyleCrossRef" href="#bib0195"><span class="elsevierStyleSup">9</span></a> Os biomarcadores do estresse oxidativo podem&#44; portanto&#44; ser potencialmente &#250;teis&#44; tanto para identificar pacientes com alto risco de dano oxidativo quanto para avaliar os efeitos de terapias antioxidantes&#46;<a class="elsevierStyleCrossRef" href="#bib0200"><span class="elsevierStyleSup">10</span></a></p><p id="par0020" class="elsevierStylePara elsevierViewall">O objetivo deste trabalho foi avaliar os par&#226;metros do estresse oxidativo em eritr&#243;citos de crian&#231;as com doen&#231;a falciforme&#44; incluindo percentuais de hem&#243;lise&#44; meta&#8208;hemoglobina&#44; glutationa reduzida&#44; subst&#226;ncias reativas ao &#225;cido tiobarbit&#250;rico&#44; atividade da glucose&#8208;6&#8208;fosfato desidrogenase&#44; esp&#233;cies reativas de oxig&#234;nio e as enzimas antioxidantes catalase e super&#243;xido dismutase&#46;</p></span><span id="sec0010" class="elsevierStyleSection elsevierViewall"><span class="elsevierStyleSectionTitle" id="sect0070">M&#233;todos</span><span id="sec0015" class="elsevierStyleSection elsevierViewall"><span class="elsevierStyleSectionTitle" id="sect0075">Subst&#226;ncias qu&#237;micas</span><p id="par0025" class="elsevierStylePara elsevierViewall">&#193;cido metafosf&#243;rico&#44; 2&#8208;mercaptoetanol&#44; pirogalol&#44; hidrocloreto de 2&#44;2&#8208;azobis &#40;2&#8208;amidinopropano&#41; &#40;AAPH&#41;&#44; &#225;cido etilendiaminotetrac&#233;tico &#40;EDTA&#41; e &#225;cido 5&#44;5&#8208;ditiobis 2&#8208;nitrobenzoico &#40;DTNB&#41; foram obtidos da Sigma&#8208;Aldrich &#40;Saint Louis&#44; MO&#44; EUA&#41;&#46; Fosfatos de s&#243;dio e de pot&#225;ssio&#44; saponina&#44; &#225;cido tricloroac&#233;tico e &#225;cido tiobarbit&#250;rico foram fornecidos pela Vetec Ltda&#46; &#40;Rio de Janeiro&#44; RJ&#44; Brasil&#41;&#46; Citrato de s&#243;dio&#44; tris &#40;hidroximetil&#41; aminometano e metanol foram obtidos da Merck &#40;Darmstadt&#44; Alemanha&#41;&#46; A atividade da G6&#8208;PD foi determinada com o PD410 dos Laborat&#243;rios Randox &#40;Antrim&#44; Reino Unido&#41;&#46; Todos os solventes org&#226;nicos eram de alta qualidade e passaram por dupla destila&#231;&#227;o e todas as outras subst&#226;ncias qu&#237;micas eram de grau anal&#237;tico&#46;</p></span><span id="sec0020" class="elsevierStyleSection elsevierViewall"><span class="elsevierStyleSectionTitle" id="sect0080">Amostras de sangue</span><p id="par0030" class="elsevierStylePara elsevierViewall">Foram obtidas amostras de sangue de 45 crian&#231;as diagnosticadas com doen&#231;a falciforme &#40;21 meninos e 24 meninas com m&#233;dia de 9 anos&#59; faixa&#58; 3&#8208;13&#41; no Departamento de Hematopediatria do Hospital das Cl&#237;nicas da Universidade Federal do Paran&#225; &#40;UFPR&#41;&#46; Um grupo de controle consistia em 280 crian&#231;as sem hemoglobinopatias &#40;137 meninos e 143 meninas com m&#233;dia de 10 anos&#59; faixa&#58; 8&#8208;11&#41;&#44; participantes do projeto de extens&#227;o universit&#225;rio intitulado &#8220;Incid&#234;ncia de anemias e parasitoses em crian&#231;as com idade escolar nas escolas municipais da regi&#227;o metropolitana de Curitiba &#8211; Paran&#225; &#8211; Brasil&#8221;&#44; da UFPR&#46; O uso de seres humanos foi aprovado pelo Comit&#234; de &#201;tica em Pesquisa Envolvendo Seres Humanos do Hospital de Cl&#237;nicas da UFPR&#46; Foi obtido o consentimento informado dos pais ou respons&#225;veis de todas as crian&#231;as&#46; As crian&#231;as com qualquer altera&#231;&#227;o hematol&#243;gica foram exclu&#237;das&#46;</p><p id="par0035" class="elsevierStylePara elsevierViewall">Foi coletada uma amostra de sangue venoso de 5<span class="elsevierStyleHsp" style=""></span>mL de cada paciente em tubos revestidos de K3&#8208;EDTA&#46; Foram separadas al&#237;quotas &#40;200<span class="elsevierStyleHsp" style=""></span>&#956;L&#41; de sangue total para determina&#231;&#227;o da atividade da G6&#8208;PD&#46; Ent&#227;o&#44; as amostras foram centrifugadas a 3&#46;000<span class="elsevierStyleHsp" style=""></span>g por 10 minutos&#46; O plasma e a camada leucoplaquet&#225;ria &#40;<span class="elsevierStyleItalic">buffy coat</span>&#41; foram removidos por aspira&#231;&#227;o e os eritr&#243;citos foram lavados com tamp&#227;o fosfato&#8208;salino &#40;PBS&#41; &#40;NaCl&#44; 150<span class="elsevierStyleHsp" style=""></span>mmol&#47;L&#59; NaH<span class="elsevierStyleInf">2</span>PO<span class="elsevierStyleInf">4</span>&#44; 1&#44;9<span class="elsevierStyleHsp" style=""></span>mmol&#47;L&#59; e Na<span class="elsevierStyleInf">2</span>HPO<span class="elsevierStyleInf">4</span>&#44; 8&#44;1<span class="elsevierStyleHsp" style=""></span>mmol&#47;L&#41; tr&#234;s vezes&#46; Por fim&#44; os gl&#243;bulos vermelhos foram suspensos em solu&#231;&#227;o PBS e &#225;gua para obter suspens&#245;es com hemat&#243;critos de 10&#37; e 40&#37; para a solu&#231;&#227;o PBS e 40&#37; para a solu&#231;&#227;o de &#225;gua&#46; A concentra&#231;&#227;o de hemoglobina foi medida em todas as suspens&#245;es&#46; Nem todas as an&#225;lises foram medidas em cada amostra devido aos volumes limitados dispon&#237;veis&#46;</p></span><span id="sec0025" class="elsevierStyleSection elsevierViewall"><span class="elsevierStyleSectionTitle" id="sect0085">Par&#226;metros hematol&#243;gicos</span><p id="par0040" class="elsevierStylePara elsevierViewall">O hemograma completo foi determinado com o contador eletr&#244;nico de c&#233;lulas Pentra 80 &#40;Horiba Medical&#44; Jap&#227;o&#41;&#46;</p></span><span id="sec0030" class="elsevierStyleSection elsevierViewall"><span class="elsevierStyleSectionTitle" id="sect0090">Concentra&#231;&#227;o de meta&#8208;hemoglobina</span><p id="par0045" class="elsevierStylePara elsevierViewall">A concentra&#231;&#227;o de meta&#8208;hemoglobina foi determinada de acordo com um m&#233;todo com base em Naoum et al&#46;<a class="elsevierStyleCrossRef" href="#bib0205"><span class="elsevierStyleSup">11</span></a> adaptado a pequenos volumes&#46; As al&#237;quotas &#40;100<span class="elsevierStyleHsp" style=""></span>&#956;L&#41; de suspens&#245;es de eritr&#243;citos a 10&#37; foram hemolizadas com 100<span class="elsevierStyleHsp" style=""></span>&#956;L de saponina a 1&#37; e estabilizadas em 1&#46;000<span class="elsevierStyleHsp" style=""></span>&#956;L de 60<span class="elsevierStyleHsp" style=""></span>mmol&#47;L de tamp&#227;o de fosfato&#59; ent&#227;o&#44; a absorb&#226;ncia foi determinada a 630<span class="elsevierStyleHsp" style=""></span>nm &#40;para metemoglobina&#41; e 540<span class="elsevierStyleHsp" style=""></span>nm &#40;para oxi&#8208;hemoglobina&#41;&#46; A concentra&#231;&#227;o de metemoglobina foi expressa em termos percentuais em rela&#231;&#227;o &#224; concentra&#231;&#227;o de hemoglobina&#46;</p></span><span id="sec0035" class="elsevierStyleSection elsevierViewall"><span class="elsevierStyleSectionTitle" id="sect0095">Determina&#231;&#227;o da glutationa reduzida</span><p id="par0050" class="elsevierStylePara elsevierViewall">A concentra&#231;&#227;o de glutationa reduzida &#40;GSH&#41; foi determinada por um m&#233;todo anteriormente descrito por Beutler&#44;<a class="elsevierStyleCrossRef" href="#bib0210"><span class="elsevierStyleSup">12</span></a> ao avaliar a redu&#231;&#227;o do &#225;cido 5&#44;5&#8242;&#8208;ditiobis&#40;2&#8208;nitrobenzoico&#41; &#40;DTNB&#41; por compostos de sulfidrila a partir da forma&#231;&#227;o de um produto ani&#244;nico de colora&#231;&#227;o amarela cuja absorb&#226;ncia foi medida em 412<span class="elsevierStyleHsp" style=""></span>nm&#46; Foram usadas al&#237;quotas de 50<span class="elsevierStyleHsp" style=""></span>&#956;L de suspens&#227;o de c&#233;lulas vermelhas a 40&#37; no PBS&#46; A concentra&#231;&#227;o de GSH foi expressa em &#956;mol&#47;gHb&#46;</p></span><span id="sec0040" class="elsevierStyleSection elsevierViewall"><span class="elsevierStyleSectionTitle" id="sect0100">Peroxida&#231;&#227;o lip&#237;dica</span><p id="par0055" class="elsevierStylePara elsevierViewall">A peroxida&#231;&#227;o lip&#237;dica de membranas de c&#233;lulas vermelhas foi avaliada com base em Cesquini et al&#46;<a class="elsevierStyleCrossRef" href="#bib0215"><span class="elsevierStyleSup">13</span></a> Foram adicionadas al&#237;quotas &#40;600<span class="elsevierStyleHsp" style=""></span>&#956;L&#41; de uma suspens&#227;o de gl&#243;bulos vermelhos a 10&#37; a 250<span class="elsevierStyleHsp" style=""></span>&#956;L de &#225;cido tricloroac&#233;tico a 25&#37; e 600<span class="elsevierStyleHsp" style=""></span>&#956;L de &#225;cido tiobarbit&#250;rico a 1&#37;&#44; fervidas por 15 minutos a 100<span class="elsevierStyleHsp" style=""></span>&#176;C e resfriadas por 5 minutos a 0<span class="elsevierStyleHsp" style=""></span>&#176;C&#46; Ent&#227;o&#44; a absorb&#226;ncia das subst&#226;ncias reativas ao &#225;cido tiobarbit&#250;rico &#40;TBARS&#41; formadas foi lida a 532<span class="elsevierStyleHsp" style=""></span>nm com o uso de ¿<span class="elsevierStyleHsp" style=""></span>&#61;<span class="elsevierStyleHsp" style=""></span>156&#47;&#40;mmole&#46;cm&#41; e as concentra&#231;&#245;es foram expressas em nmol&#47;gHb&#46;</p></span><span id="sec0045" class="elsevierStyleSection elsevierViewall"><span class="elsevierStyleSectionTitle" id="sect0105">Medi&#231;&#227;o da hem&#243;lise</span><p id="par0060" class="elsevierStylePara elsevierViewall">A hem&#243;lise da hem&#225;cia foi feita conforme descrito por Banerjee et al&#46;&#44;<a class="elsevierStyleCrossRef" href="#bib0220"><span class="elsevierStyleSup">14</span></a> adaptada a microplacas por meio da mistura de uma suspens&#227;o de gl&#243;bulos vermelhos a 10&#37; com PBS com quantidades vari&#225;veis de solu&#231;&#245;es de AAPH &#40;obtiveram&#8208;se as concentra&#231;&#245;es finais de 50&#44; 100 e 150<span class="elsevierStyleHsp" style=""></span>mmol&#47;L&#41;&#46; A mistura da rea&#231;&#227;o foi incubada por 3 horas a 37<span class="elsevierStyleHsp" style=""></span>&#176;C&#44; com agita&#231;&#227;o&#46; A extens&#227;o da hem&#243;lise foi determinada por espectrofotometria por meio da medi&#231;&#227;o da absorb&#226;ncia do hemolisado a 540<span class="elsevierStyleHsp" style=""></span>nm em um leitor de microplacas &#40;Thermo Scientific&#44; Thermo Plate&#44; EUA&#41;&#46; Gl&#243;bulos vermelhos em uma solu&#231;&#227;o de 200<span class="elsevierStyleHsp" style=""></span>mmol&#47;L de AAPH foram o controle de 100&#37; de hem&#243;lise&#46;</p></span><span id="sec0050" class="elsevierStyleSection elsevierViewall"><span class="elsevierStyleSectionTitle" id="sect0110">Atividade da glucose&#8208;6&#8208;fosfato desidrogenase &#40;G6&#8208;PD&#41;</span><p id="par0065" class="elsevierStylePara elsevierViewall">Al&#237;quotas &#40;200<span class="elsevierStyleHsp" style=""></span>&#956;L&#41; de sangue total antes do isolamento de eritr&#243;citos foram lavadas com PBS de 2<span class="elsevierStyleHsp" style=""></span>mL tr&#234;s vezes&#46; A atividade da G6&#8208;PD foi determinada com o analisador autom&#225;tico Cobas Mira &#40;Roche&#44; Mannheim&#44; Alemanha&#41; com o kit comercial PD410 &#40;Randox&#44; Antrim&#44; Reino Unido&#41; conforme descrito no manual do fabricante&#46;</p></span><span id="sec0055" class="elsevierStyleSection elsevierViewall"><span class="elsevierStyleSectionTitle" id="sect0115">Atividade da super&#243;xido dismutase</span><p id="par0070" class="elsevierStylePara elsevierViewall">A atividade enzim&#225;tica teve como base um m&#233;todo adaptado a partir da auto&#8208;oxida&#231;&#227;o de pirogalol de Beutler&#46;<a class="elsevierStyleCrossRef" href="#bib0210"><span class="elsevierStyleSup">12</span></a> Al&#237;quotas de 200<span class="elsevierStyleHsp" style=""></span>&#956;L de gl&#243;bulos vermelhos embaladas foram hemolisadas com 300<span class="elsevierStyleHsp" style=""></span>&#956;L de &#225;gua deionizada fria e foi preparado um extrato de clorof&#243;rmio e etanol&#46; A mistura foi centrifugada a 2300<span class="elsevierStyleHsp" style=""></span>g por 10<span class="elsevierStyleHsp" style=""></span>min&#46; Quantidades vari&#225;veis do extrato sobrenadante l&#237;mpido &#40;0&#44; 20&#44; 40&#44; 60&#44; 80&#44; 100 e 300<span class="elsevierStyleHsp" style=""></span>&#956;L&#41; foram adicionadas a uma solu&#231;&#227;o de tris&#8208;hidrocloreto &#40;tris&#8208;HCl&#41; e &#225;gua&#46; Ap&#243;s 10<span class="elsevierStyleHsp" style=""></span>min&#44; 20<span class="elsevierStyleHsp" style=""></span>&#956;L de uma solu&#231;&#227;o de pirogalol a 1<span class="elsevierStyleHsp" style=""></span>mmol&#47;L foram adicionados a cada tubo e a absorb&#226;ncia foi aferida a 412<span class="elsevierStyleHsp" style=""></span>nm em uma microplaca&#46; A quantidade de extrato necess&#225;ria para inibir a auto&#8208;oxida&#231;&#227;o do pirogalol em 50&#37; &#233; usada para determinar o n&#237;vel de atividade enzim&#225;tica&#46;</p></span><span id="sec0060" class="elsevierStyleSection elsevierViewall"><span class="elsevierStyleSectionTitle" id="sect0120">Atividade da catalase</span><p id="par0075" class="elsevierStylePara elsevierViewall">A atividade enzim&#225;tica foi determinada por meio de um m&#233;todo adaptado de Beutler&#44;<a class="elsevierStyleCrossRef" href="#bib0210"><span class="elsevierStyleSup">12</span></a> a partir da medida da taxa de decomposi&#231;&#227;o do per&#243;xido de hidrog&#234;nio pela catalase por espectrofotometria a 240<span class="elsevierStyleHsp" style=""></span>nm&#46; Al&#237;quotas de 50<span class="elsevierStyleHsp" style=""></span>&#956;L de uma suspens&#227;o de gl&#243;bulos vermelhos a 40&#37; foram adicionadas a 450<span class="elsevierStyleHsp" style=""></span>&#956;L de uma solu&#231;&#227;o hemolisante de &#946;&#8208;mercaptoetanol &#40;0&#44;7<span class="elsevierStyleHsp" style=""></span>mmol&#47;L&#41; e EDTA &#40;0&#44;27<span class="elsevierStyleHsp" style=""></span>mol&#47;L&#41;&#46; Essa solu&#231;&#227;o foi dilu&#237;da em PBS na propor&#231;&#227;o 1&#58;100 e 10<span class="elsevierStyleHsp" style=""></span>&#956;L<span class="elsevierStyleHsp" style=""></span>da solu&#231;&#227;o final foram adicionados a 990<span class="elsevierStyleHsp" style=""></span>&#956;L<span class="elsevierStyleHsp" style=""></span>da solu&#231;&#227;o de per&#243;xido de hidrog&#234;nio&#46; A diminui&#231;&#227;o da absorb&#226;ncia do sistema foi aferida por 10<span class="elsevierStyleHsp" style=""></span>min&#46;</p></span><span id="sec0065" class="elsevierStyleSection elsevierViewall"><span class="elsevierStyleSectionTitle" id="sect0125">Esp&#233;cies reativas de oxig&#234;nio intracelular</span><p id="par0080" class="elsevierStylePara elsevierViewall">Esp&#233;cies reativas de oxig&#234;nio foram determinadas de acordo com um m&#233;todo com base em L&#243;pez&#8208;Revuelta et al&#46;&#44;<a class="elsevierStyleCrossRef" href="#bib0225"><span class="elsevierStyleSup">15</span></a> adaptado a pequenos volumes de amostras de sangue em microplacas&#46; Eritr&#243;citos &#40;995<span class="elsevierStyleHsp" style=""></span>&#956;L de uma suspens&#227;o de PBS a 10&#37; v&#47;v&#41; foram incubados com 5<span class="elsevierStyleHsp" style=""></span>&#956;L de diclorodihidrofluoresce&#237;na diacetato &#40;DCFDA&#44; 10<span class="elsevierStyleHsp" style=""></span>mol&#47;L&#41; a 37<span class="elsevierStyleHsp" style=""></span>&#176;C por 30 minutos&#46; Essa suspens&#227;o foi dilu&#237;da em 9&#44;0<span class="elsevierStyleHsp" style=""></span>mL de PBS e 37&#44;5<span class="elsevierStyleHsp" style=""></span>&#956;L dessa solu&#231;&#227;o foram&#44; ent&#227;o&#44; adicionados a 112&#44;5<span class="elsevierStyleHsp" style=""></span>&#956;L de PBS em placas de 96 po&#231;os&#46; As esp&#233;cies reativas de oxig&#234;nio foram determinadas por meio de um fluor&#237;metro GloMax&#174;&#8208;Multi Microplate Multimode Reader &#40;Promega Corporation&#44; EUA&#41;&#46; Nessas condi&#231;&#245;es&#44; o DCFDA foi hidrolisado a 2&#8242;&#44;7&#8242;&#8208;diclorodihidrofluoresce&#237;na &#40;DCFH<span class="elsevierStyleInf">2</span>&#41;&#44; que&#44; ent&#227;o&#44; foi disponibilizado para oxida&#231;&#227;o pelas esp&#233;cies reativas de oxig&#234;nio &#40;ERO&#41; para produzir 2&#44;7&#8208;diclorofluoresce&#237;na &#40;DCF&#41;&#46; A fluoresc&#234;ncia foi determinada a 530<span class="elsevierStyleHsp" style=""></span>nm ap&#243;s excita&#231;&#227;o a 495<span class="elsevierStyleHsp" style=""></span>nm&#46; A forma&#231;&#227;o de esp&#233;cies reativas de oxig&#234;nio foi expressa como unidades de fluoresc&#234;ncia &#40;UF&#41;&#47;gHb&#46;</p></span><span id="sec0070" class="elsevierStyleSection elsevierViewall"><span class="elsevierStyleSectionTitle" id="sect0130">An&#225;lise estat&#237;stica</span><p id="par0085" class="elsevierStylePara elsevierViewall">Foi feita com o <span class="elsevierStyleItalic">software</span> Statistica 8&#46;0 &#40;StatSoft&#44; EUA&#41;&#46; N&#227;o foi identificado valor at&#237;pico&#46; O teste de Kolmogorov&#8208;Smirnov foi usado para avaliar a normalidade e todos os par&#226;metros foram distribu&#237;dos normalmente&#46; Os dados foram expressos como m&#233;dia<span class="elsevierStyleHsp" style=""></span>&#177;<span class="elsevierStyleHsp" style=""></span>desvio padr&#227;o e comparados entre grupos que usam o teste <span class="elsevierStyleItalic">t</span> de Student&#59; um valor de p<span class="elsevierStyleHsp" style=""></span>&#60;<span class="elsevierStyleHsp" style=""></span>0&#44;05 foi considerado significativo&#46;</p></span></span><span id="sec0075" class="elsevierStyleSection elsevierViewall"><span class="elsevierStyleSectionTitle" id="sect0135">Resultados</span><p id="par0090" class="elsevierStylePara elsevierViewall">Os dados provenientes de hemogramas de crian&#231;as saud&#225;veis e pacientes com doen&#231;a falciforme est&#227;o ilustrados na <a class="elsevierStyleCrossRef" href="#tbl0005">tabela 1</a>&#46; Foram observadas as diferen&#231;as estatisticamente significativas para todos os par&#226;metros&#44; exceto para a hemoglobina corpuscular m&#233;dia &#40;HCM&#41; &#40;p<span class="elsevierStyleHsp" style=""></span>&#60;<span class="elsevierStyleHsp" style=""></span>0&#44;05&#41;&#46;</p><elsevierMultimedia ident="tbl0005"></elsevierMultimedia><p id="par0095" class="elsevierStylePara elsevierViewall">Os dados provenientes de par&#226;metros de estresse oxidativo est&#227;o ilustrados na <a class="elsevierStyleCrossRef" href="#tbl0010">tabela 2</a>&#44; que compara os pacientes com doen&#231;a falciforme e crian&#231;as saud&#225;veis&#46; Foram observadas as diferen&#231;as estatisticamente significativas para meta&#8208;hemoglobina&#44; TBARS&#44; percentual de hem&#243;lise&#44; atividade da G6&#8208;PD e esp&#233;cies reativas de oxig&#234;nio &#40;p<span class="elsevierStyleHsp" style=""></span>&#60;<span class="elsevierStyleHsp" style=""></span>0&#44;05&#41;&#46;</p><elsevierMultimedia ident="tbl0010"></elsevierMultimedia></span><span id="sec0080" class="elsevierStyleSection elsevierViewall"><span class="elsevierStyleSectionTitle" id="sect0140">Discuss&#227;o</span><p id="par0100" class="elsevierStylePara elsevierViewall">Os eritr&#243;citos normais sofrem estresse oxidativo devido &#224; produ&#231;&#227;o de esp&#233;cies reativas de oxig&#234;nio que resultam do metabolismo de oxig&#234;nio&#46; Contudo&#44; isso &#233; restaurado de forma eficiente pelos sistemas antioxidantes altamente poderosos da c&#233;lula&#44; sem qualquer efeito problem&#225;tico&#46; O estresse oxidativo ocorre como resultado de um desequil&#237;brio entre a produ&#231;&#227;o de esp&#233;cies reativas de oxig&#234;nio e as defesas antioxidantes&#46;<a class="elsevierStyleCrossRef" href="#bib0230"><span class="elsevierStyleSup">16</span></a></p><p id="par0105" class="elsevierStylePara elsevierViewall">Na doen&#231;a falciforme&#44; o estresse oxidativo poder&#225; ser resultado de n&#237;veis elevados de meta&#8208;hemoglobina S&#44; que &#233; menos est&#225;vel do que a meta&#8208;hemoglobina A e leva &#224; hem&#243;lise intravascular&#44;<a class="elsevierStyleCrossRef" href="#bib0235"><span class="elsevierStyleSup">17</span></a> &#224; les&#227;o de isquemia&#8208;reperfus&#227;o&#44; &#224; inflama&#231;&#227;o cr&#244;nica e a uma maior auto&#8208;oxida&#231;&#227;o da hemoglobina falciforme&#46;<a class="elsevierStyleCrossRefs" href="#bib0240"><span class="elsevierStyleSup">18&#44;19</span></a> Muitos antioxidantes potenciais s&#227;o de interesse com rela&#231;&#227;o &#224; doen&#231;a falciforme<a class="elsevierStyleCrossRef" href="#bib0250"><span class="elsevierStyleSup">20</span></a> e v&#225;rios estudos demonstraram aumentos significativos em marcadores de estresse e comportamentos diferentes em sistemas de defesa antioxidante em pacientes com doen&#231;a falciforme quando comparados com indiv&#237;duos saud&#225;veis&#46;<a class="elsevierStyleCrossRef" href="#bib0255"><span class="elsevierStyleSup">21</span></a></p><p id="par0110" class="elsevierStylePara elsevierViewall">Nossos resultados para as amostras de sangue confirmam v&#225;rias caracter&#237;sticas da doen&#231;a falciforme j&#225; conhecidas&#44; como a anemia hemol&#237;tica&#44;<a class="elsevierStyleCrossRef" href="#bib0255"><span class="elsevierStyleSup">21</span></a> comprovada por baixos n&#237;veis de hemoglobina&#44;<a class="elsevierStyleCrossRef" href="#bib0185"><span class="elsevierStyleSup">7</span></a> e o aumento nos n&#237;veis dos gl&#243;bulos brancos e das plaquetas&#46;<a class="elsevierStyleCrossRef" href="#bib0180"><span class="elsevierStyleSup">6</span></a></p><p id="par0115" class="elsevierStylePara elsevierViewall">Conforme demonstrado anteriormente&#44;<a class="elsevierStyleCrossRef" href="#bib0190"><span class="elsevierStyleSup">8</span></a> os n&#237;veis de meta&#8208;hemoglobina aumentam em indiv&#237;duos com a doen&#231;a falciforme&#46; Existe uma transfer&#234;ncia de el&#233;trons na intera&#231;&#227;o de liga&#231;&#227;o entre o heme e o oxig&#234;nio &#40;O<span class="elsevierStyleInf">2</span>&#41; na hemoglobina oxigenada&#46; Quando a hemoglobina est&#225; desoxigenada&#44; o ferro heme normalmente continua no estado ferroso&#46;<a class="elsevierStyleCrossRef" href="#bib0250"><span class="elsevierStyleSup">20</span></a> Nessa troca&#44; quando ocorre a auto&#8208;oxida&#231;&#227;o da hemoglobina&#44; as altera&#231;&#245;es resultam em meta&#8208;hemoglobina&#44; com o ferro heme no estado f&#233;rrico&#46;<a class="elsevierStyleCrossRef" href="#bib0190"><span class="elsevierStyleSup">8</span></a> As altera&#231;&#245;es na fun&#231;&#227;o ou na estrutura dos eritr&#243;citos podem levar a um fluxo maior de meta&#8208;hemoglobina&#44; que pode levar ao estresse oxidativo&#46;<a class="elsevierStyleCrossRef" href="#bib0225"><span class="elsevierStyleSup">15</span></a></p><p id="par0120" class="elsevierStylePara elsevierViewall">O aumento do estresse oxidativo intra e extraeritrocit&#225;rio induz a peroxida&#231;&#227;o lip&#237;dica e a instabilidade da membrana&#46;<a class="elsevierStyleCrossRef" href="#bib0220"><span class="elsevierStyleSup">14</span></a> As TBARS s&#227;o um dos biomarcadores existentes e essa avalia&#231;&#227;o &#233; uma quantifica&#231;&#227;o indireta dos processos de peroxida&#231;&#227;o lip&#237;dica&#44; o que faz disso um bom indicador de est&#237;mulos pr&#243;&#8208;oxidantes&#46; De acordo com os resultados registrados anteriormente&#44;<a class="elsevierStyleCrossRefs" href="#bib0245"><span class="elsevierStyleSup">19&#44;20&#44;22</span></a> observamos n&#237;veis significativamente mais elevados de TBARS em pacientes com a doen&#231;a falciforme do que nos controles&#46;</p><p id="par0125" class="elsevierStylePara elsevierViewall">Os eritr&#243;citos falciformes r&#237;gidos e deformados t&#234;m uma vida &#250;til reduzida e s&#227;o submetidos a hem&#243;lise tanto intravascular quanto extravascular&#46;<a class="elsevierStyleCrossRef" href="#bib0265"><span class="elsevierStyleSup">23</span></a> Observamos percentuais mais elevados de hem&#243;lise em eritr&#243;citos de crian&#231;as com a doen&#231;a falciforme do que no grupo de controle&#44; tanto em suspens&#245;es de base de eritr&#243;citos quanto em suspens&#245;es incubadas com um agente oxidante&#46;</p><p id="par0130" class="elsevierStylePara elsevierViewall">A G6&#8208;PD &#233; uma enzima importante relacionada &#224; defesa antioxidante em eritr&#243;citos&#46;<a class="elsevierStyleCrossRef" href="#bib0250"><span class="elsevierStyleSup">20</span></a> Observamos uma atividade mais elevada dessa enzima em pacientes com a doen&#231;a falciforme do que no grupo de controle&#46; Foi registrado anteriormente que os eritr&#243;citos de pacientes com a doen&#231;a falciforme apresentam um percentual cada vez maior de reticul&#243;citos&#44; ao passo que a atividade da G6&#8208;PD nos reticul&#243;citos &#233; normal&#44; mas cai exponencialmente conforme as c&#233;lulas vermelhas envelhecem&#46;<a class="elsevierStyleCrossRef" href="#bib0270"><span class="elsevierStyleSup">24</span></a></p><p id="par0135" class="elsevierStylePara elsevierViewall">As c&#233;lulas falciformes geram espontaneamente cerca de duas vezes mais esp&#233;cies reativas de oxig&#234;nio do que os gl&#243;bulos vermelhos normais&#46;<a class="elsevierStyleCrossRef" href="#bib0275"><span class="elsevierStyleSup">25</span></a> Em conformidade com os achados de George et al&#46;&#44;<a class="elsevierStyleCrossRef" href="#bib0280"><span class="elsevierStyleSup">26</span></a> tamb&#233;m demonstramos n&#237;veis elevados de esp&#233;cies reativas de oxig&#234;nio em eritr&#243;citos falciformes&#46;</p><p id="par0140" class="elsevierStylePara elsevierViewall">A glutationa reduzida &#40;GSH&#41; est&#225; presente em altas concentra&#231;&#245;es em eritr&#243;citos e atua sozinha ou por meio da glutationa peroxidase como principal fonte redutora para manter a integridade da c&#233;lula&#46;<a class="elsevierStyleCrossRef" href="#bib0235"><span class="elsevierStyleSup">17</span></a> As medi&#231;&#245;es de GSH e de sua forma oxidada glutationa dissulfeto &#40;GSSG&#41; foram consideradas indicadores &#250;teis de estresse oxidativo <span class="elsevierStyleItalic">in vivo</span>&#46;<a class="elsevierStyleCrossRef" href="#bib0285"><span class="elsevierStyleSup">27</span></a> A maior parte dos estudos em adultos com doen&#231;a falciforme relatou alguns d&#233;ficits na s&#237;ntese end&#243;gena de GSH&#44; provavelmente devido a seu consumo por meio do aumento na produ&#231;&#227;o de oxidantes&#46;<a class="elsevierStyleCrossRefs" href="#bib0280"><span class="elsevierStyleSup">26&#44;28</span></a> Embora Rusanova et al&#46;<a class="elsevierStyleCrossRef" href="#bib0260"><span class="elsevierStyleSup">22</span></a> tenham apresentado altos n&#237;veis de GSH em pacientes pedi&#225;tricos com doen&#231;a falciforme&#44; no presente estudo n&#227;o encontramos diferen&#231;a nos n&#237;veis de GSH entre crian&#231;as com doen&#231;a falciforme e o grupo de controle&#46;</p><p id="par0145" class="elsevierStylePara elsevierViewall">A super&#243;xido dismutase pode converter o super&#243;xido em per&#243;xido de hidrog&#234;nio e a catalase pode remover o per&#243;xido de hidrog&#234;nio excedente&#46;<a class="elsevierStyleCrossRef" href="#bib0230"><span class="elsevierStyleSup">16</span></a> Segundo Silva et al&#46;&#44;<a class="elsevierStyleCrossRef" href="#bib0250"><span class="elsevierStyleSup">20</span></a> o aumento na gera&#231;&#227;o de pr&#243;&#8208;oxidantes em doen&#231;a falciforme resulta em uma defici&#234;ncia de antioxidantes&#46; Contudo&#44; existem algumas discrep&#226;ncias entre estudos sobre super&#243;xido dismutase e n&#237;veis de catalase nessa doen&#231;a&#44; alguns estudos observam o aumento da atividade e outros observam a diminui&#231;&#227;o dos n&#237;veis&#46;<a class="elsevierStyleCrossRef" href="#bib0295"><span class="elsevierStyleSup">29</span></a> Um aumento na atividade dessas enzimas possivelmente constitui um mecanismo de defesa em resposta ao aumento do estresse oxidativo<a class="elsevierStyleCrossRef" href="#bib0245"><span class="elsevierStyleSup">19</span></a> ou pode ser consequ&#234;ncia de um aumento no conte&#250;do de reticul&#243;citos em amostras de sangue de pacientes com doen&#231;a falciforme&#46; Contudo&#44; uma diminui&#231;&#227;o nos n&#237;veis das enzimas estava relacionada &#224; gravidade da doen&#231;a nos pacientes&#46;<a class="elsevierStyleCrossRefs" href="#bib0250"><span class="elsevierStyleSup">20&#44;22</span></a> Esses achados aparentemente contradit&#243;rios podem dever&#8208;se &#224;s diferen&#231;as na extens&#227;o do estresse oxidativo&#44; da gravidade da doen&#231;a&#44; do polimorfismo enzim&#225;tico e do cofator enzim&#225;tico&#46;<a class="elsevierStyleCrossRef" href="#bib0295"><span class="elsevierStyleSup">29</span></a> Nossos resultados n&#227;o mostraram diferen&#231;a entre as atividades dessas enzimas em crian&#231;as com doen&#231;a falciforme e em crian&#231;as saud&#225;veis&#44; de acordo com Cho et al&#46;&#44;<a class="elsevierStyleCrossRef" href="#bib0300"><span class="elsevierStyleSup">30</span></a> com rela&#231;&#227;o &#224; catalase&#46; Esses resultados podem dever&#8208;se &#224; grande variabilidade individual encontrada nos pacientes&#46;</p><p id="par0150" class="elsevierStylePara elsevierViewall">Em vista de evid&#234;ncias que sugerem que um excesso de estresse oxidativo tem implica&#231;&#245;es na fisiopatologia da doen&#231;a falciforme&#44; a avalia&#231;&#227;o de par&#226;metros de estresse oxidativo nesses pacientes poder&#225; fornecer informa&#231;&#245;es &#250;teis sobre o uso de medica&#231;&#245;es atuais e poder&#225; levar ao desenvolvimento de novas estrat&#233;gias terap&#234;uticas&#46;<a class="elsevierStyleCrossRefs" href="#bib0200"><span class="elsevierStyleSup">10&#44;19&#44;20</span></a> O monitoramento do estresse oxidativo envolve a observa&#231;&#227;o de diferentes par&#226;metros associados a biomarcadores pr&#243;&#8208;oxidantes e antioxidantes&#46;<a class="elsevierStyleCrossRef" href="#bib0285"><span class="elsevierStyleSup">27</span></a> Contudo&#44; o uso de um biomarcador isolado e a medi&#231;&#227;o de antioxidantes individuais provavelmente n&#227;o s&#227;o &#237;ndices &#250;teis de estado oxidativo&#46; O equil&#237;brio oxidante&#8208;antioxidante envolve rea&#231;&#245;es bioqu&#237;micas que exigem a avalia&#231;&#227;o de muitos resultados&#46;<a class="elsevierStyleCrossRef" href="#bib0280"><span class="elsevierStyleSup">26</span></a></p><p id="par0155" class="elsevierStylePara elsevierViewall">Este estudo avaliou oito marcadores de estresse oxidativo&#44; incluindo par&#226;metros pr&#243;&#8208;oxidantes e antioxidantes&#46; Os resultados indicam a presen&#231;a de um estado hiperoxidativo em crian&#231;as com doen&#231;a falciforme&#44; que pode ser observado por seus n&#237;veis elevados de metemoglobina&#44; TBARS&#44; hem&#243;lise&#44; esp&#233;cies reativas de oxig&#234;nio e atividade da G6&#8208;PD&#46; Foram usadas t&#233;cnicas simples para determinar esses par&#226;metros com pequenos volumes de sangue&#46; Os par&#226;metros que apareceram alterados em crian&#231;as com doen&#231;a falciforme podem ser &#250;teis em avalia&#231;&#245;es de progress&#227;o da doen&#231;a e tratamentos&#46;</p></span><span id="sec0085" class="elsevierStyleSection elsevierViewall"><span class="elsevierStyleSectionTitle" id="sect0145">Conflitos de interesse</span><p id="par0160" class="elsevierStylePara elsevierViewall">Os autores declaram n&#227;o haver conflitos de interesse&#46;</p></span></span>"
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                  \t\t\t\t" class=""><thead title="thead"><tr title="table-row"><th class="td" title="table-head  " align="" valign="top" scope="col">&nbsp;\t\t\t\t\t\t\n
                  \t\t\t\t</th><th class="td" title="table-head  " align="left" valign="top" scope="col">Grupo de controle&nbsp;\t\t\t\t\t\t\n
                  \t\t\t\t</th><th class="td" title="table-head  " align="left" valign="top" scope="col">CV&nbsp;\t\t\t\t\t\t\n
                  \t\t\t\t</th><th class="td" title="table-head  " align="left" valign="top" scope="col">Pacientes&nbsp;\t\t\t\t\t\t\n
                  \t\t\t\t</th><th class="td" title="table-head  " align="left" valign="top" scope="col">CV&nbsp;\t\t\t\t\t\t\n
                  \t\t\t\t</th><th class="td" title="table-head  " align="left" valign="top" scope="col"><span class="elsevierStyleItalic">p</span>&nbsp;\t\t\t\t\t\t\n
                  \t\t\t\t</th></tr><tr title="table-row"><th class="td" title="table-head  " align="" valign="top" scope="col" style="border-bottom: 2px solid black">&nbsp;\t\t\t\t\t\t\n
                  \t\t\t\t</th><th class="td" title="table-head  " align="left" valign="top" scope="col" style="border-bottom: 2px solid black">n<span class="elsevierStyleHsp" style=""></span>&#61;<span class="elsevierStyleHsp" style=""></span>280&nbsp;\t\t\t\t\t\t\n
                  \t\t\t\t</th><th class="td" title="table-head  " align="" valign="top" scope="col" style="border-bottom: 2px solid black">&nbsp;\t\t\t\t\t\t\n
                  \t\t\t\t</th><th class="td" title="table-head  " align="left" valign="top" scope="col" style="border-bottom: 2px solid black">n<span class="elsevierStyleHsp" style=""></span>&#61;<span class="elsevierStyleHsp" style=""></span>45&nbsp;\t\t\t\t\t\t\n
                  \t\t\t\t</th><th class="td" title="table-head  " align="" valign="top" scope="col" style="border-bottom: 2px solid black">&nbsp;\t\t\t\t\t\t\n
                  \t\t\t\t</th><th class="td" title="table-head  " align="" valign="top" scope="col" style="border-bottom: 2px solid black">&nbsp;\t\t\t\t\t\t\n
                  \t\t\t\t</th></tr></thead><tbody title="tbody"><tr title="table-row"><td class="td-with-role" title="table-entry ; entry_with_role_rowhead " align="left" valign="top">GV &#40;10<span class="elsevierStyleSup">6</span>&#47;mm<span class="elsevierStyleSup">3</span>&#41;<a class="elsevierStyleCrossRef" href="#tblfn0005"><span class="elsevierStyleSup">a</span></a>&nbsp;\t\t\t\t\t\t\n
                  \t\t\t\t</td><td class="td" title="table-entry  " align="char" valign="top">4&#44;8<span class="elsevierStyleHsp" style=""></span>&#177;<span class="elsevierStyleHsp" style=""></span>0&#44;3&nbsp;\t\t\t\t\t\t\n
                  \t\t\t\t</td><td class="td" title="table-entry  " align="char" valign="top">7&#44;0&nbsp;\t\t\t\t\t\t\n
                  \t\t\t\t</td><td class="td" title="table-entry  " align="char" valign="top">3&#44;2<span class="elsevierStyleHsp" style=""></span>&#177;<span class="elsevierStyleHsp" style=""></span>0&#44;9&nbsp;\t\t\t\t\t\t\n
                  \t\t\t\t</td><td class="td" title="table-entry  " align="char" valign="top">29&#44;2&nbsp;\t\t\t\t\t\t\n
                  \t\t\t\t</td><td class="td" title="table-entry  " align="char" valign="top">&#60; 0&#44;001&nbsp;\t\t\t\t\t\t\n
                  \t\t\t\t</td></tr><tr title="table-row"><td class="td-with-role" title="table-entry ; entry_with_role_rowhead " align="left" valign="top">Hemoglobina &#40;g&#47;dL&#41;<a class="elsevierStyleCrossRef" href="#tblfn0005"><span class="elsevierStyleSup">a</span></a>&nbsp;\t\t\t\t\t\t\n
                  \t\t\t\t</td><td class="td" title="table-entry  " align="char" valign="top">13&#44;5<span class="elsevierStyleHsp" style=""></span>&#177;<span class="elsevierStyleHsp" style=""></span>0&#44;9&nbsp;\t\t\t\t\t\t\n
                  \t\t\t\t</td><td class="td" title="table-entry  " align="char" valign="top">6&#44;6&nbsp;\t\t\t\t\t\t\n
                  \t\t\t\t</td><td class="td" title="table-entry  " align="char" valign="top">8&#44;9<span class="elsevierStyleHsp" style=""></span>&#177;<span class="elsevierStyleHsp" style=""></span>1&#44;9&nbsp;\t\t\t\t\t\t\n
                  \t\t\t\t</td><td class="td" title="table-entry  " align="char" valign="top">21&#44;5&nbsp;\t\t\t\t\t\t\n
                  \t\t\t\t</td><td class="td" title="table-entry  " align="char" valign="top">&#60; 0&#44;001&nbsp;\t\t\t\t\t\t\n
                  \t\t\t\t</td></tr><tr title="table-row"><td class="td-with-role" title="table-entry ; entry_with_role_rowhead " align="left" valign="top">Hemat&#243;crito &#40;&#37;&#41;<a class="elsevierStyleCrossRef" href="#tblfn0005"><span class="elsevierStyleSup">a</span></a>&nbsp;\t\t\t\t\t\t\n
                  \t\t\t\t</td><td class="td" title="table-entry  " align="char" valign="top">39&#44;4<span class="elsevierStyleHsp" style=""></span>&#177;<span class="elsevierStyleHsp" style=""></span>2&#44;7&nbsp;\t\t\t\t\t\t\n
                  \t\t\t\t</td><td class="td" title="table-entry  " align="char" valign="top">6&#44;7&nbsp;\t\t\t\t\t\t\n
                  \t\t\t\t</td><td class="td" title="table-entry  " align="char" valign="top">26&#44;7<span class="elsevierStyleHsp" style=""></span>&#177;<span class="elsevierStyleHsp" style=""></span>5&#44;6&nbsp;\t\t\t\t\t\t\n
                  \t\t\t\t</td><td class="td" title="table-entry  " align="char" valign="top">20&#44;9&nbsp;\t\t\t\t\t\t\n
                  \t\t\t\t</td><td class="td" title="table-entry  " align="char" valign="top">&#60; 0&#44;001&nbsp;\t\t\t\t\t\t\n
                  \t\t\t\t</td></tr><tr title="table-row"><td class="td-with-role" title="table-entry ; entry_with_role_rowhead " align="left" valign="top">VCM &#40;fl&#41;<a class="elsevierStyleCrossRef" href="#tblfn0005"><span class="elsevierStyleSup">a</span></a>&nbsp;\t\t\t\t\t\t\n
                  \t\t\t\t</td><td class="td" title="table-entry  " align="char" valign="top">82&#44;3<span class="elsevierStyleHsp" style=""></span>&#177;<span class="elsevierStyleHsp" style=""></span>3&#44;9&nbsp;\t\t\t\t\t\t\n
                  \t\t\t\t</td><td class="td" title="table-entry  " align="char" valign="top">4&#44;8&nbsp;\t\t\t\t\t\t\n
                  \t\t\t\t</td><td class="td" title="table-entry  " align="char" valign="top">86&#44;3<span class="elsevierStyleHsp" style=""></span>&#177;<span class="elsevierStyleHsp" style=""></span>11&#44;8&nbsp;\t\t\t\t\t\t\n
                  \t\t\t\t</td><td class="td" title="table-entry  " align="char" valign="top">13&#44;7&nbsp;\t\t\t\t\t\t\n
                  \t\t\t\t</td><td class="td" title="table-entry  " align="char" valign="top">&#60; 0&#44;05&nbsp;\t\t\t\t\t\t\n
                  \t\t\t\t</td></tr><tr title="table-row"><td class="td-with-role" title="table-entry ; entry_with_role_rowhead " align="left" valign="top">HCM &#40;pg&#41;&nbsp;\t\t\t\t\t\t\n
                  \t\t\t\t</td><td class="td" title="table-entry  " align="char" valign="top">28&#44;2<span class="elsevierStyleHsp" style=""></span>&#177;<span class="elsevierStyleHsp" style=""></span>1&#44;6&nbsp;\t\t\t\t\t\t\n
                  \t\t\t\t</td><td class="td" title="table-entry  " align="char" valign="top">5&#44;5&nbsp;\t\t\t\t\t\t\n
                  \t\t\t\t</td><td class="td" title="table-entry  " align="char" valign="top">28&#44;9<span class="elsevierStyleHsp" style=""></span>&#177;<span class="elsevierStyleHsp" style=""></span>4&#44;64&nbsp;\t\t\t\t\t\t\n
                  \t\t\t\t</td><td class="td" title="table-entry  " align="char" valign="top">16&#44;1&nbsp;\t\t\t\t\t\t\n
                  \t\t\t\t</td><td class="td" title="table-entry  " align="char" valign="top">&#62; 0&#44;05&nbsp;\t\t\t\t\t\t\n
                  \t\t\t\t</td></tr><tr title="table-row"><td class="td-with-role" title="table-entry ; entry_with_role_rowhead " align="left" valign="top">CHCM &#40;g&#47;dL&#41;<a class="elsevierStyleCrossRef" href="#tblfn0005"><span class="elsevierStyleSup">a</span></a>&nbsp;\t\t\t\t\t\t\n
                  \t\t\t\t</td><td class="td" title="table-entry  " align="char" valign="top">34&#44;3<span class="elsevierStyleHsp" style=""></span>&#177;<span class="elsevierStyleHsp" style=""></span>1&#44;2&nbsp;\t\t\t\t\t\t\n
                  \t\t\t\t</td><td class="td" title="table-entry  " align="char" valign="top">3&#44;6&nbsp;\t\t\t\t\t\t\n
                  \t\t\t\t</td><td class="td" title="table-entry  " align="char" valign="top">33&#44;5<span class="elsevierStyleHsp" style=""></span>&#177;<span class="elsevierStyleHsp" style=""></span>2&#44;1&nbsp;\t\t\t\t\t\t\n
                  \t\t\t\t</td><td class="td" title="table-entry  " align="char" valign="top">6&#44;2&nbsp;\t\t\t\t\t\t\n
                  \t\t\t\t</td><td class="td" title="table-entry  " align="char" valign="top">&#60; 0&#44;01&nbsp;\t\t\t\t\t\t\n
                  \t\t\t\t</td></tr><tr title="table-row"><td class="td-with-role" title="table-entry ; entry_with_role_rowhead " align="left" valign="top">GB &#40;10<span class="elsevierStyleSup">3</span>&#47;mm<span class="elsevierStyleSup">3</span>&#41;<a class="elsevierStyleCrossRef" href="#tblfn0005"><span class="elsevierStyleSup">a</span></a>&nbsp;\t\t\t\t\t\t\n
                  \t\t\t\t</td><td class="td" title="table-entry  " align="char" valign="top">6&#44;6<span class="elsevierStyleHsp" style=""></span>&#177;<span class="elsevierStyleHsp" style=""></span>1&#44;4&nbsp;\t\t\t\t\t\t\n
                  \t\t\t\t</td><td class="td" title="table-entry  " align="char" valign="top">21&#44;2&nbsp;\t\t\t\t\t\t\n
                  \t\t\t\t</td><td class="td" title="table-entry  " align="char" valign="top">13&#44;8<span class="elsevierStyleHsp" style=""></span>&#177;<span class="elsevierStyleHsp" style=""></span>6&#44;1&nbsp;\t\t\t\t\t\t\n
                  \t\t\t\t</td><td class="td" title="table-entry  " align="char" valign="top">44&#44;3&nbsp;\t\t\t\t\t\t\n
                  \t\t\t\t</td><td class="td" title="table-entry  " align="char" valign="top">&#60; 0&#44;001&nbsp;\t\t\t\t\t\t\n
                  \t\t\t\t</td></tr><tr title="table-row"><td class="td-with-role" title="table-entry ; entry_with_role_rowhead " align="left" valign="top">PLA &#40;10<span class="elsevierStyleSup">3</span>&#47;mm<span class="elsevierStyleSup">3</span>&#41;<a class="elsevierStyleCrossRef" href="#tblfn0005"><span class="elsevierStyleSup">a</span></a>&nbsp;\t\t\t\t\t\t\n
                  \t\t\t\t</td><td class="td" title="table-entry  " align="char" valign="top">292&#44;4<span class="elsevierStyleHsp" style=""></span>&#177;<span class="elsevierStyleHsp" style=""></span>58&#44;3&nbsp;\t\t\t\t\t\t\n
                  \t\t\t\t</td><td class="td" title="table-entry  " align="char" valign="top">19&#44;9&nbsp;\t\t\t\t\t\t\n
                  \t\t\t\t</td><td class="td" title="table-entry  " align="char" valign="top">458&#44;5<span class="elsevierStyleHsp" style=""></span>&#177;<span class="elsevierStyleHsp" style=""></span>199&#44;0&nbsp;\t\t\t\t\t\t\n
                  \t\t\t\t</td><td class="td" title="table-entry  " align="char" valign="top">43&#44;4&nbsp;\t\t\t\t\t\t\n
                  \t\t\t\t</td><td class="td" title="table-entry  " align="char" valign="top">&#60; 0&#44;001&nbsp;\t\t\t\t\t\t\n
                  \t\t\t\t</td></tr></tbody></table>
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                  \t\t\t\t" class=""><thead title="thead"><tr title="table-row"><th class="td" title="table-head  " align="" valign="top" scope="col">&nbsp;\t\t\t\t\t\t\n
                  \t\t\t\t</th><th class="td" title="table-head  " align="left" valign="top" scope="col">Grupo de controle&nbsp;\t\t\t\t\t\t\n
                  \t\t\t\t</th><th class="td" title="table-head  " align="left" valign="top" scope="col">Pacientes&nbsp;\t\t\t\t\t\t\n
                  \t\t\t\t</th><th class="td" title="table-head  " align="left" valign="top" scope="col"><span class="elsevierStyleItalic">p</span>&nbsp;\t\t\t\t\t\t\n
                  \t\t\t\t</th></tr><tr title="table-row"><th class="td" title="table-head  " align="" valign="top" scope="col" style="border-bottom: 2px solid black">&nbsp;\t\t\t\t\t\t\n
                  \t\t\t\t</th><th class="td" title="table-head  " align="left" valign="top" scope="col" style="border-bottom: 2px solid black">n<span class="elsevierStyleHsp" style=""></span>&#61;<span class="elsevierStyleHsp" style=""></span>100&nbsp;\t\t\t\t\t\t\n
                  \t\t\t\t</th><th class="td" title="table-head  " align="left" valign="top" scope="col" style="border-bottom: 2px solid black">n<span class="elsevierStyleHsp" style=""></span>&#61;<span class="elsevierStyleHsp" style=""></span>45&nbsp;\t\t\t\t\t\t\n
                  \t\t\t\t</th><th class="td" title="table-head  " align="" valign="top" scope="col" style="border-bottom: 2px solid black">&nbsp;\t\t\t\t\t\t\n
                  \t\t\t\t</th></tr></thead><tbody title="tbody"><tr title="table-row"><td class="td-with-role" title="table-entry ; entry_with_role_rowhead " align="left" valign="top">METHb &#40;&#37;&#41;<a class="elsevierStyleCrossRef" href="#tblfn0010"><span class="elsevierStyleSup">a</span></a>&nbsp;\t\t\t\t\t\t\n
                  \t\t\t\t</td><td class="td" title="table-entry  " align="char" valign="top">2&#44;2<span class="elsevierStyleHsp" style=""></span>&#177;<span class="elsevierStyleHsp" style=""></span>0&#44;4&nbsp;\t\t\t\t\t\t\n
                  \t\t\t\t</td><td class="td" title="table-entry  " align="char" valign="top">4&#44;5<span class="elsevierStyleHsp" style=""></span>&#177;<span class="elsevierStyleHsp" style=""></span>1&#44;1&nbsp;\t\t\t\t\t\t\n
                  \t\t\t\t</td><td class="td" title="table-entry  " align="char" valign="top">&#60; 0&#44;001&nbsp;\t\t\t\t\t\t\n
                  \t\t\t\t</td></tr><tr title="table-row"><td class="td-with-role" title="table-entry ; entry_with_role_rowhead " align="left" valign="top">GSH &#40;&#956;mol&#47;gHb&#41;&nbsp;\t\t\t\t\t\t\n
                  \t\t\t\t</td><td class="td" title="table-entry  " align="char" valign="top">6&#44;4<span class="elsevierStyleHsp" style=""></span>&#177;<span class="elsevierStyleHsp" style=""></span>1&#44;4&nbsp;\t\t\t\t\t\t\n
                  \t\t\t\t</td><td class="td" title="table-entry  " align="char" valign="top">6&#44;6<span class="elsevierStyleHsp" style=""></span>&#177;<span class="elsevierStyleHsp" style=""></span>2&#44;3&nbsp;\t\t\t\t\t\t\n
                  \t\t\t\t</td><td class="td" title="table-entry  " align="char" valign="top">&#62; 0&#44;05&nbsp;\t\t\t\t\t\t\n
                  \t\t\t\t</td></tr><tr title="table-row"><td class="td-with-role" title="table-entry ; entry_with_role_rowhead " align="left" valign="top">TBARS &#40;nmol&#47;gHb&#41;<a class="elsevierStyleCrossRef" href="#tblfn0010"><span class="elsevierStyleSup">a</span></a>&nbsp;\t\t\t\t\t\t\n
                  \t\t\t\t</td><td class="td" title="table-entry  " align="char" valign="top">24&#44;6<span class="elsevierStyleHsp" style=""></span>&#177;<span class="elsevierStyleHsp" style=""></span>5&#44;8&nbsp;\t\t\t\t\t\t\n
                  \t\t\t\t</td><td class="td" title="table-entry  " align="char" valign="top">41&#44;5<span class="elsevierStyleHsp" style=""></span>&#177;<span class="elsevierStyleHsp" style=""></span>20&#44;1&nbsp;\t\t\t\t\t\t\n
                  \t\t\t\t</td><td class="td" title="table-entry  " align="char" valign="top">&#60; 0&#44;001&nbsp;\t\t\t\t\t\t\n
                  \t\t\t\t</td></tr><tr title="table-row"><td class="td-with-role" title="table-entry ; entry_with_role_rowhead " align="left" valign="top">HEMO 0<a class="elsevierStyleCrossRefs" href="#tblfn0010"><span class="elsevierStyleSup">a&#44;b</span></a>&nbsp;\t\t\t\t\t\t\n
                  \t\t\t\t</td><td class="td" title="table-entry  " align="char" valign="top">1&#44;1<span class="elsevierStyleHsp" style=""></span>&#177;<span class="elsevierStyleHsp" style=""></span>0&#44;4&nbsp;\t\t\t\t\t\t\n
                  \t\t\t\t</td><td class="td" title="table-entry  " align="char" valign="top">4&#44;7<span class="elsevierStyleHsp" style=""></span>&#177;<span class="elsevierStyleHsp" style=""></span>1&#44;7&nbsp;\t\t\t\t\t\t\n
                  \t\t\t\t</td><td class="td" title="table-entry  " align="char" valign="top">&#60; 0&#44;001&nbsp;\t\t\t\t\t\t\n
                  \t\t\t\t</td></tr><tr title="table-row"><td class="td-with-role" title="table-entry ; entry_with_role_rowhead " align="left" valign="top">HEMO 50<a class="elsevierStyleCrossRefs" href="#tblfn0010"><span class="elsevierStyleSup">a&#44;b</span></a>&nbsp;\t\t\t\t\t\t\n
                  \t\t\t\t</td><td class="td" title="table-entry  " align="char" valign="top">25&#44;0<span class="elsevierStyleHsp" style=""></span>&#177;<span class="elsevierStyleHsp" style=""></span>7&#44;9&nbsp;\t\t\t\t\t\t\n
                  \t\t\t\t</td><td class="td" title="table-entry  " align="char" valign="top">49&#44;2<span class="elsevierStyleHsp" style=""></span>&#177;<span class="elsevierStyleHsp" style=""></span>19&#44;4&nbsp;\t\t\t\t\t\t\n
                  \t\t\t\t</td><td class="td" title="table-entry  " align="char" valign="top">&#60; 0&#44;001&nbsp;\t\t\t\t\t\t\n
                  \t\t\t\t</td></tr><tr title="table-row"><td class="td-with-role" title="table-entry ; entry_with_role_rowhead " align="left" valign="top">HEMO 100<a class="elsevierStyleCrossRefs" href="#tblfn0010"><span class="elsevierStyleSup">a&#44;b</span></a>&nbsp;\t\t\t\t\t\t\n
                  \t\t\t\t</td><td class="td" title="table-entry  " align="char" valign="top">55&#44;5<span class="elsevierStyleHsp" style=""></span>&#177;<span class="elsevierStyleHsp" style=""></span>10&#44;2&nbsp;\t\t\t\t\t\t\n
                  \t\t\t\t</td><td class="td" title="table-entry  " align="char" valign="top">80&#44;7<span class="elsevierStyleHsp" style=""></span>&#177;<span class="elsevierStyleHsp" style=""></span>13&#44;6&nbsp;\t\t\t\t\t\t\n
                  \t\t\t\t</td><td class="td" title="table-entry  " align="char" valign="top">&#60; 0&#44;001&nbsp;\t\t\t\t\t\t\n
                  \t\t\t\t</td></tr><tr title="table-row"><td class="td-with-role" title="table-entry ; entry_with_role_rowhead " align="left" valign="top">HEMO 150<a class="elsevierStyleCrossRefs" href="#tblfn0010"><span class="elsevierStyleSup">a&#44;b</span></a>&nbsp;\t\t\t\t\t\t\n
                  \t\t\t\t</td><td class="td" title="table-entry  " align="char" valign="top">80&#44;1<span class="elsevierStyleHsp" style=""></span>&#177;<span class="elsevierStyleHsp" style=""></span>7&#44;5&nbsp;\t\t\t\t\t\t\n
                  \t\t\t\t</td><td class="td" title="table-entry  " align="char" valign="top">92&#44;6<span class="elsevierStyleHsp" style=""></span>&#177;<span class="elsevierStyleHsp" style=""></span>5&#44;1&nbsp;\t\t\t\t\t\t\n
                  \t\t\t\t</td><td class="td" title="table-entry  " align="char" valign="top">&#60; 0&#44;001&nbsp;\t\t\t\t\t\t\n
                  \t\t\t\t</td></tr><tr title="table-row"><td class="td-with-role" title="table-entry ; entry_with_role_rowhead " align="left" valign="top">G6&#8208;PD &#40;U&#47;gHb&#41;<a class="elsevierStyleCrossRef" href="#tblfn0010"><span class="elsevierStyleSup">a</span></a>&nbsp;\t\t\t\t\t\t\n
                  \t\t\t\t</td><td class="td" title="table-entry  " align="char" valign="top">6&#44;2<span class="elsevierStyleHsp" style=""></span>&#177;<span class="elsevierStyleHsp" style=""></span>1&#44;1&nbsp;\t\t\t\t\t\t\n
                  \t\t\t\t</td><td class="td" title="table-entry  " align="char" valign="top">13&#44;2<span class="elsevierStyleHsp" style=""></span>&#177;<span class="elsevierStyleHsp" style=""></span>3&#44;3&nbsp;\t\t\t\t\t\t\n
                  \t\t\t\t</td><td class="td" title="table-entry  " align="char" valign="top">&#60; 0&#44;001&nbsp;\t\t\t\t\t\t\n
                  \t\t\t\t</td></tr><tr title="table-row"><td class="td-with-role" title="table-entry ; entry_with_role_rowhead " align="left" valign="top">SOD &#40;U&#47;gHb&#41;&nbsp;\t\t\t\t\t\t\n
                  \t\t\t\t</td><td class="td" title="table-entry  " align="char" valign="top">1&#44;846&#44;1<span class="elsevierStyleHsp" style=""></span>&#177;<span class="elsevierStyleHsp" style=""></span>457&#44;2&nbsp;\t\t\t\t\t\t\n
                  \t\t\t\t</td><td class="td" title="table-entry  " align="char" valign="top">1&#44;832&#44;4<span class="elsevierStyleHsp" style=""></span>&#177;<span class="elsevierStyleHsp" style=""></span>647&#44;1&nbsp;\t\t\t\t\t\t\n
                  \t\t\t\t</td><td class="td" title="table-entry  " align="char" valign="top">&#62; 0&#44;05&nbsp;\t\t\t\t\t\t\n
                  \t\t\t\t</td></tr><tr title="table-row"><td class="td-with-role" title="table-entry ; entry_with_role_rowhead " align="left" valign="top">CAT &#40;U&#47;gHb&#41;&nbsp;\t\t\t\t\t\t\n
                  \t\t\t\t</td><td class="td" title="table-entry  " align="char" valign="top">2&#44;6 10<span class="elsevierStyleSup">5</span><span class="elsevierStyleHsp" style=""></span>&#177;<span class="elsevierStyleHsp" style=""></span>6&#44;6 10<span class="elsevierStyleSup">4</span>&nbsp;\t\t\t\t\t\t\n
                  \t\t\t\t</td><td class="td" title="table-entry  " align="char" valign="top">2&#44;9 10<span class="elsevierStyleSup">5</span><span class="elsevierStyleHsp" style=""></span>&#177;<span class="elsevierStyleHsp" style=""></span>8&#44;5 10<span class="elsevierStyleSup">4</span>&nbsp;\t\t\t\t\t\t\n
                  \t\t\t\t</td><td class="td" title="table-entry  " align="char" valign="top">&#62; 0&#44;05&nbsp;\t\t\t\t\t\t\n
                  \t\t\t\t</td></tr><tr title="table-row"><td class="td-with-role" title="table-entry ; entry_with_role_rowhead " align="left" valign="top">ERO &#40;UF&#47;gHb&#41;<a class="elsevierStyleCrossRef" href="#tblfn0010"><span class="elsevierStyleSup">a</span></a>&nbsp;\t\t\t\t\t\t\n
                  \t\t\t\t</td><td class="td" title="table-entry  " align="char" valign="top">1&#46;468&#44;0<span class="elsevierStyleHsp" style=""></span>&#177;<span class="elsevierStyleHsp" style=""></span>296&#44;2&nbsp;\t\t\t\t\t\t\n
                  \t\t\t\t</td><td class="td" title="table-entry  " align="char" valign="top">2&#46;427&#44;5<span class="elsevierStyleHsp" style=""></span>&#177;<span class="elsevierStyleHsp" style=""></span>1110&#44;3&nbsp;\t\t\t\t\t\t\n
                  \t\t\t\t</td><td class="td" title="table-entry  " align="char" valign="top">&#60; 0&#44;001&nbsp;\t\t\t\t\t\t\n
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Informação do artigo

ISSN: 22555536
Idioma original: Português

DOI:10.1016/j.jpedp.2016.04.005

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Ano/Mês	Html	Pdf	Total

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2023 Outubro	23	28	51
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2023 Mar�o	31	24	55
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